贴块法培养MSC，脐带的处理若干问题

jifengtang

最近一直在培养脐带间充质干细胞，对于脐带处理流程有些问题需要求教一下：
/ c, H; r4 b* k% @9 F3 A. J一、首先我想问一下脐带的结构，看到网上有一些说法，脐带最外层是羊膜组织，再里面是华通氏胶，再往里是比较松软的结缔组织，里面包裹2根动脉一根静脉。
0 h/ z! Z& h0 J. y二、我处理的流程：是把脐带冲洗后剪成小段，除去血管里残留的血，将脐带从中间剖开，去除静脉动脉和结缔组织，用手术刀切成2mm3的小块，然后贴块，培养瓶先用血清润洗。
0 ?& W- K3 y4 a
6 H: H8 I0 O7 Y% i, Z$ x4 Q问题1：) l4 r6 ]" B8 q- y3 h+ N. R
网上看到的脐带结构的说法是否准确？( ^8 P( M' [. z/ L+ a5 }
问题2：2 f9 j, i: `4 j4 B+ Q; y! d
处理时不剥离羊膜，原代细胞爬出影响有多大？* b( J8 z& D) x5 ~9 {4 i9 j# I# |
问题3：$ I; G/ M: g! i# v: B$ x7 N
里面的结缔组织是否需要去除，如果去除不干净会有什么影响？0 W( _! d, \: h6 f! K$ T
问题4：% D/ w: h2 ^9 v6 Y4 V6 F. C9 {
一般最后都是用剪刀剪碎华通氏胶，用手术刀切成小块有什么不一样？* U* u" l- c. S/ Z( V! @4 {, ~% l

saliai2016

最好将羊膜去掉，可以保证细胞的纯度；
& k3 M8 U9 |8 ]. X4 _) V至于手术刀和剪刀的问题，个人觉得，剪刀可能更好操作一些，剪得碎了爬出来细胞的概率相对大些。

晗晗

1.网上说的没有问题
/ ?4 q( X+ d# O( L2.3.组织贴壁法这些可以都不用去除，要是酶消化法就需要剔除外面的羊膜
' w' f/ P& b& O: e' Z/ F. @4.还是用手术剪把，因为那个东西有点滑，比较艮，用手术剪比较方便

tingting2113

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2 e- k0 X4 ]5 I) U, s! r9 l- h! i, Z& a$ m- P
1、结构准确! Q8 q7 D  [" u
2、不剥离羊膜爬出的细胞比较杂，影响后续使用。$ j5 A; l; f( z
3、我们没有去处结缔组织这一步。4 P* L1 E2 m% y
（1）纵向剖开脐带小段（我们一般直接用组织镊撕开）。; P% o( U$ X* c7 T# z
（2）去除三根血管，其间静脉壁比较薄，去除是时候要注意，如果去除不干净，培养的细胞中可能会混有静脉内皮细胞。
. Q. _+ a/ g4 e7 V! z（3）此时静脉已展开呈现片状，直接用组织镊撕取华通氏胶，避开最下层的羊膜，也就是脐带的最外层。" i' N; t" F3 l: ?7 B" {! q3 X
（4）剪碎，培养。6 D9 m# H# \5 Z: ]9 o* X5 v
4、手术刀切的快块比较大，另外操作过程暴露面大。剪的话，直接把华通氏胶放在离心管里，剪起来很方便。

jifengtang

回复 suruyu 的帖子% y: b# ?/ Y  ~* F! p
' r* `* Y8 k5 x7 j0 N4 Z
非常感谢！！！

suruyu

1、结构式正确的；
) g* i7 C9 I/ Y1 S, s5 W+ Y/ d0 w2、我们不剥离，细胞状态一直很好，纯度也高；' F5 t+ f; b( D  I' ]
3、我们通常都是直接剥离完3根血管，剩下组织全部贴壁培养了，木有问题；
, b9 W# P7 {* x' r4、用眼科剪很容易操作。

happy_noel

1.解剖结构准确，是这个样子。; J  R/ o4 A  I( |0 ^( Y
2.不剥离羊膜，对爬出细胞影响不大，杂细胞都可以通过换液去除掉。5 s0 l8 M7 F/ r3 x
3.里面的结缔组织不用去除干净，没有太大影响。
0 p: c* ?  J9 a/ E) J4.用剪刀比用手术刀好操作。

jifengtang

回复 firstaider 的帖子
' N  j9 c# r# |$ X( p
* |, C, X' m3 w0 E3 M非常感谢！！！

firstaider

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! d, T2 w8 G1 H: P6 ^+ {& N! j3 [3 K; G$ _9 N( w6 g3 E" g, J
问题1：5 m, t* A- Q* p+ E" \
脐带结构的说法准确
5 B# y; ^$ s9 q  W问题2：
; p$ W5 u& X1 {4 a* R! x处理时不剥离羊膜，上皮细胞会影响原代细胞爬出
6 e9 w% L5 D5 q0 R问题3：! B8 q8 _6 Q9 F9 v; f" P
里面的结缔组织不需要去除，否则华通氏胶得率太低% K" i. p# O2 s6 `' i2 }) F# S0 ]+ @
问题4：
% u! b, H, f/ f  {* p3 v一般最后都是用剪刀剪碎华通氏胶，用手术刀切成小块降低了细胞爬出的效率

zhangjieyctc

回复 wuhuaguo88l 的帖子' l2 `  y! E' ?) k

) L" A! ^$ q( o结构既然没错的话，那结缔组织在里面没有影响嘛？