贴块法培养MSC，脐带的处理若干问题

jifengtang

最近一直在培养脐带间充质干细胞，对于脐带处理流程有些问题需要求教一下：. S- K- j% ?, U% `( u
一、首先我想问一下脐带的结构，看到网上有一些说法，脐带最外层是羊膜组织，再里面是华通氏胶，再往里是比较松软的结缔组织，里面包裹2根动脉一根静脉。
" S6 z0 _2 U4 m: o9 m8 H二、我处理的流程：是把脐带冲洗后剪成小段，除去血管里残留的血，将脐带从中间剖开，去除静脉动脉和结缔组织，用手术刀切成2mm3的小块，然后贴块，培养瓶先用血清润洗。& g  ~( [) c7 P) V2 u! \
1 ?$ n7 C6 O# y; J9 p, T4 S3 U# ]4 G
问题1：  o6 P# |0 Y4 i. @' {7 B
网上看到的脐带结构的说法是否准确？) `3 \- L; c' J; @; H8 s8 a
问题2：7 d& P# q+ H: ]& J0 G+ j
处理时不剥离羊膜，原代细胞爬出影响有多大？
7 {6 D, S. A5 o) o. _3 n/ L问题3：
/ n0 k2 J/ L  l# b8 ?3 k里面的结缔组织是否需要去除，如果去除不干净会有什么影响？$ O# d. ?) R7 Q/ R( E
问题4：
% q' {0 Q# q/ B6 P一般最后都是用剪刀剪碎华通氏胶，用手术刀切成小块有什么不一样？+ O5 x9 G- U6 R; U9 z

wuhuaguo88l

问题1：网上图片还是比较准确的
+ g4 R* m5 \$ D( @, E问题2：一般是要去除羊膜的9 m( M  ^- w5 ~4 ^8 Y1 P8 y+ I
问题3：去除三根血管和羊膜后，剩下的都可以用来做原代
" R$ Y. E8 C' q+ {; M/ n5 f$ C* E9 X问题4：剪刀剪碎比较方便，手术刀貌似不好用。

haibara007007

1：结构非常准确，就是这个样子6 U0 F; ]" {$ ?
2:去除比较好，不然细胞会有一些显上皮状
7 g0 B' Z6 F# E9 O$ m3：可以不去除. e4 ^' v) S# ^* p9 A1 e
4：一般都是用剪刀，区别的话，这个还真没做过

chuanbaozang

同意楼上几位的回答

fuyinsheng

1、结构没有问题
" S* W+ e5 x: `) o. K9 g2、一般需要将华通式胶单独分离下来，以确保细胞纯度，因为羊膜上皮细胞生长条件与间充质相似，已造成混杂2 a0 N+ B, F" F7 u
3、去除血管的同时尽量将残留的血管壁等杂志从华通式胶上分离下来' y/ O/ k& R0 J
4、刀切的组织块相对较大，降低了细胞爬出的效率，剪刀更细碎一些

月_幻影

1.结构正确；
$ X- S* P/ {& i8 x' `8 D9 m2.做原代一般建议剥离羊膜；
. j0 D: A% F( b9 W  A7 k3.我们做的时候一般是将脐带剖开，去除三根血管然后直接用镊子从羊膜上往下撕华通式胶；
) B% q3 [4 y. P: B5 m4.通常使用剪刀剪碎后铺瓶培养，用刀切似乎不太方便也没有剪刀剪得碎。

jifengtang

回复 haibara007007 的帖子' r# v6 ~) ^+ |0 ~: p4 k
3 V/ p$ C* m4 r/ f2 W! c0 e& A1 j
我刚做时间不长，羊膜和华通氏胶有些分不太清楚，请问羊膜厚度大概有多少？

fuyinsheng

回复 jifengtang 的帖子; C$ _" T: c8 f+ W8 k
% }# A9 T8 c3 r% U! v* ?
羊膜非常薄，百十微米左右，最外面一小层

小豆芽

1、结构式正确的；
/ r+ b7 j2 A& N- l$ \2、在组织块贴壁培养时，一般是需要剥离羊膜的，这样可以保证细胞的纯度，同时也有利于细胞爬出；
7 J" ]% p3 b2 J+ K3 d: W2 F5 A3、最好是能够去除，当然不去除也不会有太大影响，可以进行原代培养；9 E! v3 {6 V5 k% [! W" {+ z
4、用刀切的话，操作不如剪刀方便，而且刀切组织块比较大，没有剪刀剪得碎。

redmaple

为保证细胞的纯度，还是要剥离；$ F) V7 c4 S: h) {  n$ V7 ?
不剥离，杂质太多，影响细胞的生长