贴块法培养MSC，脐带的处理若干问题

jifengtang

最近一直在培养脐带间充质干细胞，对于脐带处理流程有些问题需要求教一下：
% ^0 ?$ \2 V8 t5 a2 c一、首先我想问一下脐带的结构，看到网上有一些说法，脐带最外层是羊膜组织，再里面是华通氏胶，再往里是比较松软的结缔组织，里面包裹2根动脉一根静脉。1 Z& }, W) U( y" ~; P# k" M0 Q
二、我处理的流程：是把脐带冲洗后剪成小段，除去血管里残留的血，将脐带从中间剖开，去除静脉动脉和结缔组织，用手术刀切成2mm3的小块，然后贴块，培养瓶先用血清润洗。
1 h% F' d9 D, Q0 Y- ^5 D" t  m0 ^* S4 t: O5 Y+ Q
问题1：% L+ J6 G2 _0 \. t% F/ L# @
网上看到的脐带结构的说法是否准确？
; _" y9 Q: n1 u问题2：  u2 z& y! H5 X
处理时不剥离羊膜，原代细胞爬出影响有多大？# B: i/ l6 v, u
问题3：
9 z9 L/ r0 y+ g4 ?  a/ Q7 A" I里面的结缔组织是否需要去除，如果去除不干净会有什么影响？# s; f4 K( o: t! a1 M8 s* ^2 X" ^  r
问题4：
. C# N1 a. E. d+ ~- T一般最后都是用剪刀剪碎华通氏胶，用手术刀切成小块有什么不一样？
$ p, `. D8 g+ l0 c4 x

wuhuaguo88l

问题1：网上图片还是比较准确的
2 w# l; R2 B" a& g+ C问题2：一般是要去除羊膜的3 ?' P" U5 I) n2 Z. K
问题3：去除三根血管和羊膜后，剩下的都可以用来做原代; L4 K( B6 U1 O/ l, I
问题4：剪刀剪碎比较方便，手术刀貌似不好用。

haibara007007

1：结构非常准确，就是这个样子
9 d. g7 P8 Z2 h9 B- E+ ]2:去除比较好，不然细胞会有一些显上皮状
7 a! L( @- Z" s" D7 V3：可以不去除/ Z( H/ F3 t' m8 Z2 y! X
4：一般都是用剪刀，区别的话，这个还真没做过

chuanbaozang

同意楼上几位的回答

fuyinsheng

1、结构没有问题
5 t- H. R6 Y# Y% J2、一般需要将华通式胶单独分离下来，以确保细胞纯度，因为羊膜上皮细胞生长条件与间充质相似，已造成混杂
  ?8 p0 E! q6 J, G4 y! x3、去除血管的同时尽量将残留的血管壁等杂志从华通式胶上分离下来  x2 [; t9 C  x' i0 p
4、刀切的组织块相对较大，降低了细胞爬出的效率，剪刀更细碎一些

月_幻影

1.结构正确；# z: V. c  x  {8 y. b
2.做原代一般建议剥离羊膜；- }4 h* V* M- ^# c
3.我们做的时候一般是将脐带剖开，去除三根血管然后直接用镊子从羊膜上往下撕华通式胶；$ Y; L, B/ p& e7 w: o7 k
4.通常使用剪刀剪碎后铺瓶培养，用刀切似乎不太方便也没有剪刀剪得碎。

jifengtang

回复 haibara007007 的帖子
' V6 j' O+ x9 N& T1 S# w" N4 S! @: p8 I- {; ^: I
我刚做时间不长，羊膜和华通氏胶有些分不太清楚，请问羊膜厚度大概有多少？

fuyinsheng

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0 q! z1 T  @* X: Y- y6 n: \6 {, j  y3 }+ n* l
羊膜非常薄，百十微米左右，最外面一小层

小豆芽

1、结构式正确的；
. D+ j; j+ K$ {3 g1 N( d6 ^2、在组织块贴壁培养时，一般是需要剥离羊膜的，这样可以保证细胞的纯度，同时也有利于细胞爬出；
. x2 ?5 `6 ]5 D% |  t7 g: z% _3、最好是能够去除，当然不去除也不会有太大影响，可以进行原代培养；2 F( ^+ o5 X0 r( I$ [
4、用刀切的话，操作不如剪刀方便，而且刀切组织块比较大，没有剪刀剪得碎。

redmaple

为保证细胞的纯度，还是要剥离；
/ j4 b" C+ a$ |& x; `, A/ n4 J不剥离，杂质太多，影响细胞的生长