贴块法培养MSC，脐带的处理若干问题

jifengtang

最近一直在培养脐带间充质干细胞，对于脐带处理流程有些问题需要求教一下：
% _. Q( f0 F! b# c. S一、首先我想问一下脐带的结构，看到网上有一些说法，脐带最外层是羊膜组织，再里面是华通氏胶，再往里是比较松软的结缔组织，里面包裹2根动脉一根静脉。' f" F) s! S8 m0 G( E6 g( N* A
二、我处理的流程：是把脐带冲洗后剪成小段，除去血管里残留的血，将脐带从中间剖开，去除静脉动脉和结缔组织，用手术刀切成2mm3的小块，然后贴块，培养瓶先用血清润洗。
9 t" k  J1 W! O/ X, Y2 \$ M+ \" D! X, T' ]0 Z' U
问题1：
' T7 D) U6 c0 J9 g网上看到的脐带结构的说法是否准确？8 O9 z' H; U3 Y3 F+ f
问题2：
5 d* j: k8 c+ @! G  K2 ^$ j处理时不剥离羊膜，原代细胞爬出影响有多大？) R& l' f* ~8 M2 _
问题3：
) D* u, r  t- `里面的结缔组织是否需要去除，如果去除不干净会有什么影响？$ u' G" {3 B2 I' q, u. n& c
问题4：
/ R7 s7 n% l. ]  a一般最后都是用剪刀剪碎华通氏胶，用手术刀切成小块有什么不一样？
4 F; Y7 t# ?, i4 V

wuhuaguo88l

问题1：网上图片还是比较准确的2 y7 D, r, Y. \2 y+ K
问题2：一般是要去除羊膜的
1 G" O: P0 z2 g7 m" P1 l问题3：去除三根血管和羊膜后，剩下的都可以用来做原代
4 y( }3 a( {  w( J2 Q3 d问题4：剪刀剪碎比较方便，手术刀貌似不好用。

haibara007007

1：结构非常准确，就是这个样子
( M2 @. ~' ]5 x, X, G+ o2:去除比较好，不然细胞会有一些显上皮状+ _9 n. I2 @! U" a4 M' \3 W
3：可以不去除5 @, P0 |8 |: w/ H" ~
4：一般都是用剪刀，区别的话，这个还真没做过

chuanbaozang

同意楼上几位的回答

fuyinsheng

1、结构没有问题
3 g6 v9 u( Y2 j0 r: I2、一般需要将华通式胶单独分离下来，以确保细胞纯度，因为羊膜上皮细胞生长条件与间充质相似，已造成混杂9 W  R3 J7 a6 T, n
3、去除血管的同时尽量将残留的血管壁等杂志从华通式胶上分离下来
5 J& X6 _  r2 }! A7 x+ A7 q4、刀切的组织块相对较大，降低了细胞爬出的效率，剪刀更细碎一些

月_幻影

1.结构正确；9 i! \" c: m) E0 }' _! d4 H" t
2.做原代一般建议剥离羊膜；3 h) r# ?, {; y* c
3.我们做的时候一般是将脐带剖开，去除三根血管然后直接用镊子从羊膜上往下撕华通式胶；/ K9 D) _3 J. E
4.通常使用剪刀剪碎后铺瓶培养，用刀切似乎不太方便也没有剪刀剪得碎。

jifengtang

回复 haibara007007 的帖子8 r/ O0 i4 m9 P- I$ t

: v# U* s' G& N3 C! c2 W我刚做时间不长，羊膜和华通氏胶有些分不太清楚，请问羊膜厚度大概有多少？

fuyinsheng

回复 jifengtang 的帖子
5 h3 J; {) w8 _1 |
! {. H6 b% ^$ r; q+ T2 M羊膜非常薄，百十微米左右，最外面一小层

小豆芽

1、结构式正确的；* O6 V0 P! f4 c& d; U2 j
2、在组织块贴壁培养时，一般是需要剥离羊膜的，这样可以保证细胞的纯度，同时也有利于细胞爬出；$ f, w" f6 C5 ^2 x" c+ j
3、最好是能够去除，当然不去除也不会有太大影响，可以进行原代培养；
1 X& l, ]2 B; M1 P4、用刀切的话，操作不如剪刀方便，而且刀切组织块比较大，没有剪刀剪得碎。

redmaple

为保证细胞的纯度，还是要剥离；6 q" [9 E- U' y' D& ]% y+ l6 g
不剥离，杂质太多，影响细胞的生长