贴块法培养MSC，脐带的处理若干问题

jifengtang

最近一直在培养脐带间充质干细胞，对于脐带处理流程有些问题需要求教一下：
) L3 i1 I1 h1 e; N; b一、首先我想问一下脐带的结构，看到网上有一些说法，脐带最外层是羊膜组织，再里面是华通氏胶，再往里是比较松软的结缔组织，里面包裹2根动脉一根静脉。
# I% x( z7 U" W" d* j二、我处理的流程：是把脐带冲洗后剪成小段，除去血管里残留的血，将脐带从中间剖开，去除静脉动脉和结缔组织，用手术刀切成2mm3的小块，然后贴块，培养瓶先用血清润洗。
3 J& N, W4 b  R4 a9 B
7 d1 T0 C1 J! W5 i+ |' t% l% U问题1：7 n# {* ]+ X& }$ k; r
网上看到的脐带结构的说法是否准确？
/ a/ I9 c- h5 k9 U+ s3 u2 t问题2：
9 Z/ B0 j7 z- ~( ~! |处理时不剥离羊膜，原代细胞爬出影响有多大？  l+ j( j. y- t( v
问题3：. H6 Y* K. c% n( c# K( v# u
里面的结缔组织是否需要去除，如果去除不干净会有什么影响？5 }: C0 N+ J2 ?
问题4：
5 x; @8 F6 T: D一般最后都是用剪刀剪碎华通氏胶，用手术刀切成小块有什么不一样？
# Q/ F; l- g& X& s0 s0 l) u% F

saliai2016

最好将羊膜去掉，可以保证细胞的纯度；0 K5 E, y5 F, y, Y6 [
至于手术刀和剪刀的问题，个人觉得，剪刀可能更好操作一些，剪得碎了爬出来细胞的概率相对大些。

晗晗

1.网上说的没有问题
) E6 x2 g7 N+ }8 I- ]# ~) O2.3.组织贴壁法这些可以都不用去除，要是酶消化法就需要剔除外面的羊膜& g2 s  ?+ ?$ i% X  H
4.还是用手术剪把，因为那个东西有点滑，比较艮，用手术剪比较方便

tingting2113

回复 jifengtang 的帖子& V1 M/ z  g5 I) g: a, M
$ ^8 w5 h+ E& [" {# s) w
1、结构准确( |# |: X' K9 e
2、不剥离羊膜爬出的细胞比较杂，影响后续使用。9 b* r4 H* E" Z5 W
3、我们没有去处结缔组织这一步。3 Q$ j/ w* t1 w' B/ [+ ^& F2 {; k
（1）纵向剖开脐带小段（我们一般直接用组织镊撕开）。
& p1 t. R+ w! `6 C& ~6 m& R（2）去除三根血管，其间静脉壁比较薄，去除是时候要注意，如果去除不干净，培养的细胞中可能会混有静脉内皮细胞。
5 R0 q& l3 d3 M# v6 P+ v8 [3 G（3）此时静脉已展开呈现片状，直接用组织镊撕取华通氏胶，避开最下层的羊膜，也就是脐带的最外层。* A( b. J9 e! ~/ {1 `
（4）剪碎，培养。: k- U1 ^, F% V! \! U
4、手术刀切的快块比较大，另外操作过程暴露面大。剪的话，直接把华通氏胶放在离心管里，剪起来很方便。

jifengtang

回复 suruyu 的帖子
1 ?% P6 [) l- \) Y; d) X5 i- T3 h
非常感谢！！！

suruyu

1、结构式正确的；& S/ K$ ?4 H) C& }
2、我们不剥离，细胞状态一直很好，纯度也高；5 X+ x, N' S/ J* F. l
3、我们通常都是直接剥离完3根血管，剩下组织全部贴壁培养了，木有问题；
. o) [7 t# V2 |; _0 _1 ^4、用眼科剪很容易操作。

happy_noel

1.解剖结构准确，是这个样子。
: p7 J2 K+ ]/ x2 b! W2.不剥离羊膜，对爬出细胞影响不大，杂细胞都可以通过换液去除掉。/ Q$ z. }9 O3 H+ I! H2 c& c  V; }
3.里面的结缔组织不用去除干净，没有太大影响。
% Q, J; z8 h# U1 L9 @$ N( D! {4.用剪刀比用手术刀好操作。

jifengtang

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/ M( t, s; B3 d2 J1 B! \, ?; {
0 Z1 }! i7 a% L& S/ X& e) y非常感谢！！！

firstaider

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7 b# H, p: d3 R+ `5 n. {! T) i1 P6 p* G7 q/ [/ g! I" B0 p
问题1：
# A) t* a$ Z& z  K9 D+ s脐带结构的说法准确5 J: Y( y: m, h
问题2：+ a% j/ C7 w# z+ k3 H! Q4 ?
处理时不剥离羊膜，上皮细胞会影响原代细胞爬出
6 C" `* O' T3 l& a% \问题3：0 H; O* S5 c7 r9 k. C. w& X$ e
里面的结缔组织不需要去除，否则华通氏胶得率太低
$ M, h( o# b1 Z% E; @0 |! B问题4：
& X: G( C: Y$ e) Q6 s2 M一般最后都是用剪刀剪碎华通氏胶，用手术刀切成小块降低了细胞爬出的效率

zhangjieyctc

回复 wuhuaguo88l 的帖子
1 Q6 P, U9 a0 r1 D  l: M9 v( g0 _: o* t6 _0 F8 r% C
结构既然没错的话，那结缔组织在里面没有影响嘛？