有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，

yingfeixiang

回复 ych123 的帖子% L3 X" F3 b: B8 e9 I6 H5 P
. b) ?! y9 F7 T
一般的5*10^5细胞就可以做出很好看的流式图，不知道你的方案是怎么设计的。

daviddow

回复 ych123 的帖子
' b# \/ w" {% ]3 {; {3 g1 l' t* r& W/ `7 G+ |$ ?
这个细胞培养起来应该很容易，而且生长速度很快。就是可能传代不能太多

ych123

回复 daviddow 的帖子
: _) |* _) M  a
+ h' j$ f8 Z  T是的，但是我看T25的瓶可以收获5*10^6细胞的以为够了，后面白白浪费一瓶细胞，主要脐血间充质干细胞培养起来确实不易啊

ych123

回复 sajiemeian 的帖子
" x" Y4 ^3 P3 ~: s$ ?3 X$ `" j/ K# E* V! H! H
T75的不是可以收获2*10^7细胞吗，怎么会少呢

daviddow

细胞数量太少了，一般应该10^6细胞

sajiemeian

是好少啊，T75的分10个也太少

ych123

回复 yingfeixiang 的帖子/ z  q* G4 o/ u- H

. `; X. @) F4 t非常感谢，今天做了一次，一个t25瓶子分装6管，在上机的时候就因为细胞数太少而失败了，伤心啊

ych123

回复 杏色玻璃 的帖子& }, k5 S1 h/ i9 ^/ m' Y6 x( ^

3 G3 _: q6 n* j! I9 ]/ R8 e好的，谢谢你

yingfeixiang

1. 消化收集所需细胞数，离心洗涤弃掉培养基，PBS悬浮细胞。
$ p+ u( d' r$ g+ m4 ^2. 准备流式上样管，分别加入相应抗体：# `5 m/ }: c7 A' p0 F. v8 R' T2 Z# o
3. 每管加入细胞悬液，与流式抗体混匀，4℃避光孵育30min。
+ {( k: e2 R0 O) ^: |% s3 j7 d4. 加入PBS缓冲液2ml混匀，1500rpm离心10min洗涤细胞。/ C& T8 k5 f5 B( n( {. M
5. 弃上清，加入1%多聚甲醛悬浮细胞。
2 d% d% r/ ]& r4 W5 \- p0 e! J- _6. 200目尼龙网过滤，准备上机检测。

杏色玻璃

收集您的细胞，pbs洗后离心弃掉PBS，加所检测的抗体，4℃孵育半小时，拿出来后加差不多3mlpbs后在离心，弃上清加大约200ul左右pbs轻弹混匀就可上机了