有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，

ych123

有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，非常感谢，，，

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学习一下，互相交流。

做梦的孩子

1. 收集细胞，生理盐水洗2次。PBS悬浮细胞，细胞浓度控制在1~9*10^6。' T# c. z1 n8 i6 o1 W
2. 将抗体加入流式检测管中。
' D* l" j% E* [7 {: v( M# Q3. 每管加入100ul 细胞悬液，与流式抗体混匀，4℃避光孵育30min。
* V3 t# Y, |# U5 }4. 加入PBS缓冲液1ml清洗2次，300g离心5min。" q! @, ]2 l' D6 f; G
5. 弃上清，加入500ml PBS重悬，然后上机。
* E" D3 Z- Q- ?# F  c6 O6. 200目尼龙网过滤，准备上机检测。

ych123

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& @, L6 O" h# v$ H  L2 K9 v
; u  A  ?' R( h) |恩，应该做5管的，震荡过的

yingfeixiang

回复 ych123 的帖子& V: |* ~' _5 O3 Q' u

( ~2 W# U9 s, T7 \: J2 d你做五管，细胞肯定够了，一个是在离心清洗时细胞丢失太多了，第二个就是最后重悬时没有做好，还在流式管底呢，可以振荡器振荡一小下

ych123

回复 zxd962735279 的帖子9 V+ `& S" ?% }$ [* e& a1 v. g

0 F1 V( A4 i3 C, X3 o, I9 b重悬不充分，有可能哦，下次我注意点

zxd962735279

回复 ych123 的帖子9 J' d0 X* v& p2 N8 I' o
. p! W! l3 u5 s1 U
我之前也出现这情况，因为细胞在最后一次洗细胞后重悬不充分导致的，不知道你是不是，

ych123

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8 Z" u# [" G7 i( g% F* n& W" t- F. f# J2 {
我是一个T25的瓶分为6管，一个对照，5个标记，后面上机老师说细胞数太少了，跑了一下就没跑了

ych123

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) l" S3 Z! ?' t5 W5 H4 w+ C4 H, m/ \
你有养过这个细胞的经历吗，求指导啊，我按照文献上面的来经常养出来都不纯，杂细胞很多

yingfeixiang

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3 H' i. Q) h0 ^5 h; E9 t3 h# A2 \4 ]2 e6 Z- b& O, Z0 Y
细胞数肯定够做的了