有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，

yingfeixiang

回复 ych123 的帖子
  l& J3 K/ T5 q. T) n* C, I$ s0 ~1 `' E% j1 f
一般的5*10^5细胞就可以做出很好看的流式图，不知道你的方案是怎么设计的。

yingfeixiang

回复 ych123 的帖子
6 N- A8 M+ }# t
2 ^$ S# l% ^0 A7 K7 r细胞数肯定够做的了

ych123

回复 daviddow 的帖子
0 ~$ e6 A0 k. P4 A9 B$ {1 Z& `. p' Z6 ^' m: I
你有养过这个细胞的经历吗，求指导啊，我按照文献上面的来经常养出来都不纯，杂细胞很多

ych123

回复 yingfeixiang 的帖子2 _: D" F1 `9 B

3 p# J3 O& r1 Q我是一个T25的瓶分为6管，一个对照，5个标记，后面上机老师说细胞数太少了，跑了一下就没跑了

zxd962735279

回复 ych123 的帖子
  n% g# t9 I; G) P; a1 Z9 h  b3 U9 L0 e, A3 ~5 Q0 B  n4 X6 Y! m
我之前也出现这情况，因为细胞在最后一次洗细胞后重悬不充分导致的，不知道你是不是，

ych123

回复 zxd962735279 的帖子
" T  X- u' H2 B, m6 G+ y+ b+ ]& H3 x, p
重悬不充分，有可能哦，下次我注意点

yingfeixiang

回复 ych123 的帖子
' i+ \4 H: }) I4 a
' K3 w6 N0 m, Q& w你做五管，细胞肯定够了，一个是在离心清洗时细胞丢失太多了，第二个就是最后重悬时没有做好，还在流式管底呢，可以振荡器振荡一小下

ych123

回复 yingfeixiang 的帖子9 b- |6 }6 u8 y8 [$ H) v
, m! C" h$ C# B' r4 ?
恩，应该做5管的，震荡过的

做梦的孩子

1. 收集细胞，生理盐水洗2次。PBS悬浮细胞，细胞浓度控制在1~9*10^6。
  C& ]- x( i  o  \" A2. 将抗体加入流式检测管中。
3 Y& b- `# n3 \3. 每管加入100ul 细胞悬液，与流式抗体混匀，4℃避光孵育30min。  F; v" n, [4 a" i$ ~
4. 加入PBS缓冲液1ml清洗2次，300g离心5min。
* C: Z( J0 [5 J7 s5. 弃上清，加入500ml PBS重悬，然后上机。4 x- s4 J& a2 }$ C- l
6. 200目尼龙网过滤，准备上机检测。

157238360jwj

学习一下，互相交流。