关于WB制胶的问题

shaozi402

我刚开始做WB，查了一些相关资料，发现在制胶的过程中有一些问题：8 G* }* i" z5 g1 q6 @4 _# P
分子克隆实验指导书上显示为：水，30%丙烯酰胺溶液，1.5mol/L Tris (PH8.8)，10%SDS，10%过硫酸铵，TEMED,+ o3 c/ e  m" m- [' L& V
可是在beyotime的凝胶配制试剂盒上却显示为水，30%丙烯酰胺溶液，1mol/L Tris (PH8.8)，10%SDS，10%过硫酸铵，TEMED
  |  g: f9 W8 s) _为什么Tris的浓度不一致呢
/ u- Y- N# X. C" @' A5 y* I7 F5 w请教各位老师
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qingxingruyu

不分浓缩胶和分离胶吗，应该都可以吧，而且试剂盒我觉得是优化后的

shaozi402

回复 qingxingruyu 的帖子# ~5 q( b5 w9 B$ q  `

8 p1 T( A3 x; z0 l" [我写的这个是分离胶: C5 l9 a9 s, I# _

moluxingke

一般实验室自己做胶，分离胶用的是1.5M的Tris。看8.8的PH应该是做分离胶用的，对western制胶来说，PH值是很重要的，浓度可能要求没有那么严格，试剂盒应该是一套优化后的体系，应该没有什么大问题。

shaozi402

回复 moluxingke 的帖子; E9 e7 D- x9 C0 N, q, x: R& X
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哦，我明白，谢谢
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yinchong42

很多时候，一些试剂用量需要灵活控制的实验，在掌握操作的同时也要弄清楚各个组分是干什么的，比如SDS-PAGE，水的作用是稀释，tris作用是调节PH和凝胶渗透压，蔗糖的作用是增大凝胶密度以免上样蛋白沉落，SDS的作用是变性蛋白，丙烯酰胺过硫酸铵的作用是构成凝胶，temed是催化；在了解了各种成分的作用之后，就可以自己设计实验方案，
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$ w9 D8 E- w9 v. Y. ]个人建议做western配胶尽量自己配，试剂盒和买来现成的胶大多不如自己配的靠谱

shaozi402

回复 yinchong42 的帖子
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谢谢您，虽然只有三行字，但是句句都中要害。

yinchong42

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8 `+ P! j" ^1 X* I# [; q不客气，相互学习！

97b1

这个按照分子克隆的来就行了，或者abcam的指南

shaozi402

回复 97b1 的帖子2 c2 U7 L8 R1 ]; R  E! x8 q' p
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好的，谢谢4 d4 D* H- n: Y