MSC成脂成骨诱导图片

Learner

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8 Q6 J# B1 y! T4 M/ ~2 U- C' k- O) o; P% F1 t/ i
1uM=1000nM

Learner

回复 stream 的帖子2 S) E6 P. q* I: _' z9 |5 n

- K8 e, n# h7 `3 u% f* _; L' n干细胞大部分都分化了，有些未分化的也老化了，我用的细胞不是经过流式细胞仪筛选的，有些本身就不是干细胞。

lkzjyx

请问楼主是做的哪种动物的MSC呢？用的什么方法分离和培养的，谢谢   
  A- i# B1 P) a& B9 Q; a因为我也在做这个方面的研究  我做的是犬的BMSC 想跟你交流下

Learner

5 O" B5 c, l+ v1 H8 f1 w+ `" G/ S  c9 R& O( K
回复 luoziwei 的帖子
+ c. j) D  G! H) o" u; i  ?0 F/ V& S- G& j8 o  [
很抱歉回复不及时，这几天出门了。
* Z0 }# C  x! Y下面是我的染色方法：
# J) C  ?& T, {' n% a) G  J固定前细胞吸去培养基用PBS洗一到二次。
# @& t0 i( c6 C3 |/ D: k  KAlizarin Red S staining:
: O' a# P0 [( n( S: I1 ]1. 4%PFA fixation at RT for 30min.3 c  h9 @* D7 w. M
2.Then wash wish PBS twice.
& I* Y0 P+ S4 M0 P" p0 B3. Add 1ml of 2% alizarin red water solution (pH4.1-4.3 use 1% NH4OH adjust pH) stain RT for 20min with gentle shaking on a rocker., R+ F8 D  q9 S8 n0 N" S
4.Then wash with PBS for 4 times with gentle shaking. The washing time could be up to 1 hour.
+ c# `; h$ z3 [, M8 p- r2 y0 h8 Z5.Leave some PBS in the well and look under microscope.

皮搋子

多少毫升中加1uM？

Learner

回复 皮搋子 的帖子/ @$ h8 z3 A* O8 a: N
- {. u4 a$ ]8 Q6 ^5 m  L
1uM=1umol/L 这要取决于你在诱导中的终体积。
. V. }$ k* f' j; V# ~% m, i% R% z9 T1M=1mol/L

Learner

回复 luoziwei 的帖子
3 _7 w9 [8 O4 [0 A, @
. y- b" |4 s/ M  g3 v' M  u  L关于油红O染色步骤：
7 M# ?4 G" S- M5 w1。 Cell fixation with 4%PFA RT for 30min.
- l9 F! T; d/ R2 z& j; |5 |2 ~" H2.   Remove PFA and wash cell with PBS once.
' m- S$ l  V; k, a5 S, {3. Then wash cell with 60% isopropanol for 30 min on a shaker." Q( T7 ~1 ]7 i' l5 S8 U6 U3 i
4. Remove 60% isopropanol and add working oil red O solution stain for 30 min on a shaker.
; A- E' j5 H: ]/ l" i$ C5. After 30min remove oil red O stain immediately and wash with PBS for 4 times.
$ E% T4 T0 `3 \, U! F% B& i: N6. Leave some PBS in the well and take picture.7 s* d$ }  x' T2 m5 y
The working oil red solution should be made fresh from the stock each time.
2 P& @% ]6 r# Q* |8 PStock solution (175mg oil red O/50ml 100% isopropanol) could store for up to one year./ H% ]: H6 C2 o! q
Working solution: dilute the oil red O stock solution with PBS(6ml oil red O stock+4ml PBS) filter with filter paper or 0.45um filter unit.

Learner

回复 lkzjyx 的帖子+ ~1 H2 J1 U+ z" o3 F+ j

" @0 `& k0 m# ]/ |$ z) B% r) E/ khuman bone marrow MSC

hxf_86

这个图片很好啊~学习了~

luoziwei

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, v3 M0 O  J- Z7 F& l) @" M6 ?  b, ]) O% _& Z; f
有两个小问题想请教一下，你是直接在孔板里诱导染色的？还是把细胞种在玻片上然后取出玻片进行染色拍照的？另外一个问题是，关于油红0染色，用60%的异丙醇洗涤是为什么呢？