请教骨髓间充质干细胞分离培养的方法

yishengyouwoly

先说说我们实验室的方法：
$ ?! e8 F6 b' D- ?0 n参照《细胞培养》这本书里，具体采用全骨髓培养方法。$ k6 V* Q: M) g6 y! J$ O9 f- a
培养方法
6 Z/ r5 U# y8 E. k, y) T1、选用4w雄性sd大鼠，取股骨胫骨，去干骺端，冲出骨髓，用pbs离心（1500转，4m），培养液（hyclone FBS 10%+DMEM F12+双抗）重悬细胞，悬液加入塑料瓶两只里培养。/ n' {" _! n0 v4 v0 ~0 x5 w
2、接种后2天左右首次换液，采用全量换液，以后每2-3天换液，8天左右传代。传代用2.5%胰酶，弯头滴灌吹打。一瓶传三瓶。1 l. J& D# d/ D) q: n
培养效果：
- H4 `0 I4 E5 o. c3 K: u细胞不纯，有多种形态细胞。细胞出老化和分化，在2-3代时候细胞不呈梭形，呈多角形，发出很多触角，不知道是什么细胞。- T7 T# R  d; @0 |% j. T
疑问：
0 s3 g* y/ e, ]1、有没有更好的培养方法？效果怎样？4 E8 s5 d) [' n4 ]
2、怎样获取纯度更高的细胞？
) h* J  W4 P- \$ }4 F& M* J3、怎样维持干细胞梭形形态，减缓分化时间？
' n( Y( q8 r) Y+ t/ X谢谢

liuerfu

取股骨胫骨后，一定要去除干净骨头外的其他肌肉，骨膜，不然会有很多杂细胞。8 @% `+ @1 D! E! b  u2 C- T
离心可以采用密度梯度离心，离心时间可以长一点。15min。
" f( I+ j2 r# Z* \血清可以用GIBICO的，防止分化。
% q+ e: K, b2 Y, ?6 M& ]: j, h, c6 G

liuerfu

http://www.stemcell8.cn/thread-43269-1-1.html
" _/ R3 g; F8 \$ R" @可以看看他们的方法
# _& j1 E% v% u7 _0 j

yishengyouwoly

谢谢两位战友

yishengyouwoly

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7 p  \. [- y2 h/ T, r1 o) j8 i. t4 u0 @! d
和你的头像有点神似，谢谢你的建议

liuerfu

大家都是新手 以后互帮互助
4 u& r! m& [( r. W

yang179

根据血量，如果血量太少，离心一下去除上面的油脂层，用红细胞裂解液裂解红细胞，因为红细胞太多贴在底部形成红细胞层会影响细胞的贴壁；如果血量有达到10ml左右，建议用ficoll分离，然后贴壁培养，换液时间我一般是4-5天。后面的就是普通细胞培养的方法。

痞子的烟头

1301918986

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5 ^! k7 G3 |) y1 _( f1 N  x
3 @- V" N7 D: m呵呵，请问进口血清养的细胞效果明显吗？我现在用的的国产血清养的效果不太好，很容易老化。

1301918986

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: C8 t3 v5 B  ^  F2 `) J. j8 A: m" Q# N. A0 U9 T  a$ y
你传代用的胰酶浓度有点大吧，一般都用的0.25%的。