脐带间充质干细胞的贴壁分离方法

xiaolong

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: S% O" L# a0 K接种后，组织块有个贴壁的环节，贴壁效果好的，加培养液后，细胞会爬的很好，如果贴壁效果不好，组织块会漂在培养液里，细胞爬的效果很差，怎样能让组织块很好的贴壁？贴壁时间多久再加培养液会好些呢？

单个核细胞

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1 k* r( z6 N: i+ g% i% j% o4 A* ^9 n" U9 Z" V4 j. Q# P# a9 d5 T
剥胶的时候，剥下来的华通胶直接放在50ml离心管内，全部剥完后剪碎，剪的过程中如果太黏，可以滴加少量PBS，不要滴太多。贴壁的时候用3ml吸管吸起组织，接种在培养瓶中。T75培养瓶每瓶贴20-25块，在培养箱中放置3-4小时后补加适量完全培养液。若是做的晚，可以第二天早上加液。以后观察的时候动作要轻盈，尽量不要使组织块漂起。7-10天后，会有细胞爬出，可以去掉组织块补加新鲜培养液继续培养，等到局部间充质干细胞密集的时候，可以传代。

xiaolong

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0 }. |: ?, G' a6 I% K; t0 @* B, C' l8 ^4 B
谢谢啊！

xiaolong

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- Q4 X- o' X+ G5 J/ g
再问，“在培养箱中放置3-4小时后补加适量完全培养液。若是做的晚，可以第二天早上加液”，如果组织块在培养瓶中贴壁，组织块在培养瓶中裸露的时间太久了，是不是会影响组织细胞的活性？

单个核细胞

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! [5 F) _; A  ?1 J
3 Y; \" ?6 U+ P, L2 M, T过夜我做过多次，没发现对细胞活性有影响。你也可以这样，刚贴完壁在每个贴壁的组织块上滴加一滴完全培养液，保持湿润就行，放置的目的主要是让组织块贴壁牢固，加入培养液后不至于漂起来。

xiaolong

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6 \9 P3 \. A! x: o( u' E. @
再谢谢啦

Demon_CN

酶消化法比贴壁法细胞长的快，生产周期短，但是消化法技术要求高，消化时间掌握比较重要消化过度会伤细胞( o9 y+ a9 X8 g% d0 K4 W- R
操作发杂一点，费用也要贵一点。5 G9 p3 x& C8 y6 D/ n; H
贴壁法，比较简单，但是周期长一点，我现在就用大概P1代冻存有10*7个细胞（养5个T75，传代一次）。缺点你懂的周期长。) j1 E2 g7 W* G5 w# c* j2 b. Q# C

xuyang0317

个人觉得，贴壁法很好，速度经济，省钱省力省时，就是培养的时间要长点，爬片时注意不要污染，成功率是100%

xuyang0317

你可以先加5分之一的培养液，第二天再补上，没问题的，我做过！

hyf198675

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8 }% \6 O( W6 Z  a/ t
4 ^/ W+ Y. k) E1 k- ]你能不能和我说下你们的实验步骤啊？我正在做酶消化法培养间充干，但培养效果不好，拜托了！