小鼠BMSC原代细胞贴壁太紧！！求助~~

why121

楼主原来做的是大鼠的BMSC啊 但标题却是小鼠的BMSC 晕了！

zhaokun826

楼主看看胰酶是什么时间配的？0 |" X$ _5 ^9 y. d, u# z
如果时间长了建议楼主重配

stefan

哎，我也遇到类似的问题，刚配好的胰酶还加了EDTA 就是消化不下来啊，真是郁闷死了，看楼主这么说。我感觉可能我的细胞也有可能老化了吧！真不知道这个到底怎么判断啊！

zkzhao_cpu

回复 lchanlon 的帖子$ }7 ^; m; v  N* s- V- V
" t5 e. Y7 a7 ]7 J: v
你好  我想请问一下你的间充质干细胞是从哪里买的？是小鼠的吗？谢谢

wf78365421

杂细胞太多。

漫步云端0511

回复 why121 的帖子5 v, X) v0 h7 d; p2 e

6 B5 M9 Q/ c1 }7 q新手向高手请教，我是刚开始做小鼠BMSC，一直养不起来，请问用哪个牌子的培养基好，需要添加生长因子吗？

绝对忠橙

我觉得有几个方面：. K) U$ r2 ]- A# B/ |" j, G* m
1.准备消化前，把胰酶放入水浴锅，温度正常后放入超净台。
" H4 \% C0 Z: Y- s( T$ ?2.倒掉废液，PBS冲洗两三次，其实吹打不会将杂细胞吹打下来，即使是造血干细胞这种悬浮细胞。4 Z- \- U5 J3 _
3.加入1mL0.125%胰酶+EDTA后轻轻摇晃，要保证所有细胞都被消化，至半数细胞漂浮，半数边圆时加入完全培养基终止消化。
' I3 Z/ e6 Z2 E1 e& E- [说句实在话，真正的bmsc应该集落很明显，而且消化很容易，根本不用胰酶加温，冰箱拿出加到培养皿里边摇晃几下细胞两分钟就消化到位了，我可是用的0.125%的胰酶哦，楼主细胞这么长，像10代之后的细胞了。

绝对忠橙

回复 漫步云端0511 的帖子) Q2 s' ?: @( `8 [. R
8 y2 D* ]+ |2 y) x, K$ a
生长因子肯定要有的，bfgf，谷氨酰胺类似物都要加

绝对忠橙

回复 aristolal23 的帖子
# |9 F& T4 M+ c3 J8 v$ v4 H! H1 j& ~  ~9 q" y! e* b$ E
这个和细胞接种密度有关系，我的经验是一只大鼠的细胞放两个T25里边，一般情况下5天或者6天就可以传代了

倒腾细胞

回复 angel-sakura 的帖子
! f$ S; u$ M; }* L: Q% [7 O1 x  D+ S7 t& z9 p3 X3 v4 p
一 个 星 期 不 去 动 它？