Taqman探针法——PCR体系的建立

xiaolong523

1、引物、探针的设计：* n+ d4 y/ M- V4 O. z9 B$ |
      探针Tm为68-70℃ ，<30 bp, 5’不能有G，G可能会淬灭荧光素，
" z0 O4 X5 |. `% m+ B3 q2 u       引物尽量靠近探针，扩增片段<400 bp，引物Tm为59-60℃
. r- B, [- b- g3 f; v2 W
( Z$ c' U! Y% k/ p* }2、反应参数的确定：
& T, L% K- _% {6 U3 f       一般为：94 ℃，10-20S
* t' F& P6 [; O! n. P                        60℃，30-60S（Taq酶5′→3′外切核酸酶活性在60℃ 最高），也可通过温度梯度优化退火温度0 F9 |- X( m3 D! F0 ?( e, o  q# D
                     
8 l, W+ \8 m$ g+ r3、优化引物和探针浓度：获得最小Ct值，最大信号/背景比值
. M% g1 r; d& T9 _+ e/ \3 J# ]% G. K       引物浓度：50-900nM3 j; h, d1 _) B. A( N
       探针浓度：50-250nM' I. L$ C' g! Z/ W+ R' N& d$ I

Tlexander

回复 xiaolong523 的帖子
6 ~( m5 r4 b) D7 q
6 L, e3 v' x6 s/ n% _3 b多来点科研新闻，或农大生科院的最新消息或科研进展