求助：自体血浆的处理

gengtongyu521

用枸橼酸钠抗凝剂采血袋采血后，处理血浆，56度灭活30min，但后期培养中，添加自体血浆，CIK细胞悬液中经常会出现絮状物，细胞活性受很大影响。我有时会重悬细胞后，过滤一下细胞悬液，去掉絮状物，再重新培养，但是细胞增殖不好，请问大家有没有遇到过？如何解决？谢啦，谢啦！

chimo100

血浆灭活后离心，去掉沉淀。细胞培养的时候，注意打散细胞团，不要等细胞团很大了再打散

我是传奇

灭活后4000转离心，取上清保存，添加自体血浆是必须的，对细胞长势有很大影响，出现絮状物即使挑出不需过滤。

吕小松

56℃灭活30分钟，每十分钟上下颠倒一下，冷却后高速离心，丢弃掉沉淀，楼主是没有离心吧，怪不得有絮状的！

小猫狸狸

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1 ]" A; x$ v- d$ h. j+ m6 J6 T- {2 ?
你能否确定是添加血浆出现絮状物，还是细胞本身原因？1 k& k+ w6 S% I6 ]& `
若是血浆原因，可以考虑灭活后放到-20℃冰箱一会，待脂肪析出后3000RPM，10min离心，取上清液。但是就算偶尔出现絮状物，也对细胞增殖影响不会很大，要经常揉袋，一天两次吧。4 a9 g; ~' w4 M8 L3 ^
还有一种可能也会出现絮状物，细胞分离后含有较多血小板或红细胞，在后期随着血小板或红细胞的死亡都会出现絮状物，只要后期处理得当，对细胞增殖影响不大。

seergene

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) [% j7 w' _6 e0 r+ o1 d
! f8 g- D% q' J. A" |以经验告诉你，出现絮状物有可能是血脂太高导致的，一般情况下无解，细胞很难培养出来，增殖出来的细胞也是以絮状存在，根本没法回输。我最近也遇到一例类似的情况，看看絮状物跟你的是不是一样。  ^* I1 o: w, M2 p0 S
http://www.stemcell8.cn/forum.ph ... d=115517&extra=

seergene

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: q# n: l8 X' C/ |- _" Q  b8 J
# Z3 ]1 g3 r( J另外忘了问了，你用的是不是宝日医的培养基。其他的培养基我不太清楚，但是用他家的培养基最好不要用枸橼酸做抗凝剂，换肝素钠吧。

cloudycity

血浆离心的时候，最好把离心减速的加速度调低···不然还是会荡起来的···或者静置过夜····再取上清

gengtongyu521

谢谢各位的建议啦，我处理血浆是经过灭活后，离心的，3000rpm，10min。

gengtongyu521

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1 H) o% ^( a. ^
' ^4 F' M0 k9 u0 t5 y( L我用的是AIM-V培养基