成脂诱导

sarah19860420

最近诱导人的TENDON STEM CELL。成骨很容易就做出来了，为什么成脂还做不出来呢，不是说成脂也很好做的吗？大家在成脂方面有什么又到经验，希望大家分享下，帮我找出问题所在，谢谢啦。6 f  C8 \. P: @$ b

& M$ x* P: S& _; k5 K  c. p& C还有成软骨诱导，形成的pellet是应该悬浮在培养液中还是最终会贴壁的？

luoziwei

软骨诱导的pellet会粘在离心管底部，像换液的话直接倒培养液都不会倒出来的。你先染给我看看你的成脂肪分化培养基的配方

gact

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+ b& q* O8 i9 o' m- X
我很想知道你的protocol。。

sarah19860420

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; ]* ~9 w/ u. J6 c( I4 E1 A8 u1 L
2 n6 r; r5 K' o成脂,DMEM(L,因为我们这的一个老师说高汤低糖都没有太大影响，所以就选择了L)+10%FBS,
5 D* H1 g" X% p$ ]5 @1uM indomethasin, 0.5mM IBMX, 10-5M的dexamethasone , Insulin 5ug/ml.
, a* w! D3 {0 I  u' s8 Y* q在这诱导过程中，细胞也死的挺多的，但是并未完全死光。是不是地塞米松的浓度太高了，我看还有用10-4M的呢。所以应该没什么问题吧。
: A' x8 ?. u" I) V; H( y: D% {* f  J
还有就是软骨诱导形成pellet如果黏在壁上，那黏住的那一部分就不会形成软骨了，对吗？

sarah19860420

回复 gact 的帖子  A0 {( P  {3 t  P" e/ S
" c5 `+ l( |+ Q" i% S- q3 H
你是说实验过程，还是实验配方。成脂的还是软骨的

luoziwei

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$ B# {1 h4 q) R- w0 J, U% `1 s( d. P' J4 v2 M8 r" m) J  `6 L
还是选择高糖吧，insulin加到10或者20，dexamethasone不算高，

luoziwei

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& l! k) A+ [- x3 j1 b+ U' H6 Q8 x
" T- G9 M! I4 U  v刚离心下来的细胞是一片沉在管底的，培养了3天后，片状的细胞会慢慢卷起来，形成球状，大概7天后，就开始分化了。你说的黏住的那部分，只是一小部分，就像一个球放在桌面上一样，因而我猜想它还是形成软骨的，但没去证实过。

gact

sarah19860420 发表于 2011-12-30 00:37 / ]9 A6 j+ U1 N
回复 gact 的帖子, k% G- c' v: a2 v$ }

+ ~9 E: T1 E& }1 w" P+ U你是说实验过程，还是实验配方。成脂的还是软骨的

1 P/ R% t" G: ^; P
more is  better

sarah19860420

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5 C- \$ A4 |1 w3 m' T4 I
7 y" n' B: \3 U% Q; E' G* t; c* }( N多谢耐心回答

sarah19860420

回复 gact 的帖子$ |! W; r4 n) D' u9 z- r
6 \! r3 `' n. Y% T0 ?8 {: v
1.铺细胞，代细胞密度达到70-90%，加入分化液，之后每三天换一次液，培养21天后进行鉴定。: F4 Y* z3 Y! i* M' {/ I
2. PBS洗，10%福尔马林固定5min2 _) {. G! R2 T# I8 D6 |2 u
3. 水洗两次
* s5 P# {0 c3 w( Q) J3.Oil Red staning.
4 i1 F$ T+ x8 m9 s4. 水洗几次。! f$ O" \, f% G0 T8 f, X9 ?; L
5.OK了。