欢迎培养MEF细胞的同仁们进来分享一下培养经验

happygrass333

你好，首先过程上来看，我们不会直接把胚胎剪碎消化。是把胚胎分离出来的小鼠去头去内脏，剪碎消化，消化时间也比较短大概有5分钟，培养基成分也是10%的血清的培液。4 D1 ], L! W( d
培养基我们是商品化的DMEM液体的，ph大概曾经测过大概是8.0，记不太清了2 S8 O% d! z% G* u" c7 k9 v$ w$ c
原代接种我们都没有计数过，通常是看离心下来的细胞量来估计，做得多了比较有经验，控制在2-3天长满，然后传代。4 D  V8 Q) U; O; E
不同老鼠批次做出来的结果是会有差异，有的细胞小，有的细胞大，所以计数不是很准确来确保你的密度合适，多做几次就有经验，控制在2-3天可以传代的密度接种，我们一般8个小鼠可以铺到6个10cm dish。
5 [3 G, P! L# j% l你说原代培养成纤维状，其实mef刚铺下去是铺得很展的，过24h就看到变成纤维状，传代长满后貌似没有增殖，其实你会发现细胞变得小小的，说明细胞数量还是增加了，长得不是单层了。gelatin不一定铺的，用的dish好的话，很容易贴壁的MEF，状态好的MEF更容易贴壁。
' o- g# {# u* g, o/ R6 d5 T  |; Z评定培养的MEF细胞看形态，是否铺的展，不要饿成丝了。

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0 r$ j9 R8 v5 U* d7 x. MMEF是单层的，本来就没有立体感。比较好的状态是刚铺下去的时候大概2小时你观察它呈圆形，有突起，有的看起来跟太阳一样中间一个核整个细胞铺得非常的开，但是第二天可以发现细胞进一步伸展变细。后面营养要是不好了，会细细的变成丝。你说的情况是不是因为小鼠的种类不同造成的，我们是昆明白。

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/ }/ l1 A# G6 ~  M6 Q! ~& R我们只用过一次c57，不好，又回归了昆明。