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首先,从图片上看,有些不像海马神经元,而且你培养环境中杂质太多,会严重影响NSCs的存活或者活力;: v: A; }' ]/ v
其次,你选用的培养基决定了你也不太可能培养出NSCs,培养基成分是具有选择性的,, d. p. z4 Y$ u" M( B9 s2 Y$ D! h
我们现在用的是DMEM/F12+2%B27+2%L-N+1%LG+1%EGF+1%Bfgf;
h/ d0 q# _9 \$ `$ W再次,你的NSCs都贴壁了,也说明不太正常,应该是多层悬浮的;
% z, m$ S- Q- o. n: _最后,需要说明的是,NSCs培养初期,需要高密度刺激增值,并可以帮助尽快剔除挑杂质细胞,你的细胞密度太低,同样可以造成细胞死亡。' V$ ?) E) r6 W* v/ Z2 k
对于细胞碎片,离心换液的速度是很重要的,通常需要800r/5min,去上清,培养至第5代才比较纯;
9 d* ]7 S7 y2 l, ]如果说是分化,你的细胞分化的形态也不对,伸张的“触角”成线状,而正常的不是这样,你可以到论坛里寻找些图片做参考。
1 Y1 p! M$ j; h+ c+ V# A4 b, d# h综上,你的不太像NSCs,方法需要你多参考文献内容。 |
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