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我的MMC也是配成母液后放了快一个月,后来用了一次,感觉效果也还行,没影响
. N8 X% O' R: V# m+ t; D& X! s但是后来我还是分装了,冻负20里面,然后加锡纸避光& V7 j3 c, R) l( }; T' z$ e
之后冻着的MMC析出了紫黑色的结晶,感觉其实也没有影响,但是你在用之前,一定要把整个结晶融完,直至完全透明(还是呈淡紫色),才能用,不然这个紫黑色的结晶会使得大量细胞死亡(它就像炒菜的时候,菜里面的一坨盐巴)
, ~% t, i. M) ]加入MMC母液的量要视你培养基的量和母液浓度而定,终浓度是10μg每ml,处理2.5h: Q+ C; R! h' y0 {* L
处理后可以用PBS洗了之后直接用,但是也可以先消化下来铺了再用,有的做得比较精细,消化下来后计数,然后再铺,这样比较好一点,因为直接用的话,可能细胞密度太大了,那么饲养层密度太大不是太好
- m" {8 F* C- e7 z+ N7 L5 S7 t) Z3 |养MEF直接10%的FBS就行了,而且不需要灭火,用高糖培养基就行了,没有注意具体成分(个人觉得丙酮酸钠和glutamin的影响不大),DMEM(gibco)就行了 |
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