【请教】外周血分单核细胞培养DCs的详细步骤

wagumaxida

7 _  i" p, g6 q

9 ?; F) v- L- h; [0 V, q* r; ^主要有几个问题亟待解决; O9 A5 y+ j1 n  X$ P/ m) l
1.外周血分淋巴细胞时，梯度离心去除血小板时，离心梯度是怎么设置的？. L$ d% f: u. X0 m2 M5 d
2.淋巴细胞贴壁获得单核细胞时：
4 L2 U8 I) E- D5 S! X  A.贴壁时需要加血请吗？需要加细胞因子吗，需要的话加哪些，量是多少？8 u( y; k$ b: O: [5 c
  B.贴壁时间是多长时间，2h还是48h？5 F( J4 H/ f0 J& u/ M
  C.贴壁时是在培养瓶中好还是在六孔板里好？, p* o  t/ ]# o# R1 G  `
  D.这一步还有什么要注意的吗？
# h& _# B2 Y, ^4 R. S- J9 x5 t3.单核细胞诱导培养成未成熟DCs这一步：9 E2 U5 F$ Y/ ^; r9 Z* x! w
  A.换液间隔怎样？半量换液还是什么其他方式？" r" c# j! t0 |6 G8 E+ D8 @1 c
  B.换液时所用培养液中因子的量是多少？$ b( b) n# K3 N# F8 i! H2 `+ Y* o* c9 n
4.未成熟DCs诱导成为成熟DCs这一步：; @' i# @6 {8 H+ W  \! ~
  A.在第几天开始诱导？
' ^. ]$ V& O. J% j& @  B.用什么因子或者药物进行诱导，量是多少？
2 _! w0 x+ n1 l/ K" r; k; L  C.诱导时还要继续添加GM-CSF、IL-4之类的吗？
- M& ]$ {) g" S0 G& h7 R7 r  D.诱导多长时间可以收获？) M/ e" z: b2 Q7 E
P.S. 如果要用荧光腺病毒感染的话，在第几天哪个阶段感染会比较好？. w2 k7 f6 M  v+ `9 t

. g% d; V% _- K( J0 L: c非常感谢！

细胞海洋

回复 hwlightning 的帖子5 a9 c$ D7 C* f5 \) q0 F1 y5 t

! L1 v6 ]3 Z; _- S看14楼

大少爷

是的，50ng/mi
% G% a+ B, t) H4 Z7 L$ t

hwlightning

回复 大少爷 的帖子1 o3 y9 i% i3 Y" Z

& _+ b1 y1 W* ]4 |% B( V请问你用的是不是PEPROTECH品牌啊
9 s0 m: N0 l( z2 t" {5 `IL-4的浓度会不会太高了导致浪费因子。

Tevirly

回复 大少爷 的帖子! f9 R! Y$ e$ r' G: c

! R7 b3 [: q% W请问如果用培养皿培养单核细胞诱导DC的话，用哪个牌子的培养皿比较好呢

deshenglll

学习，受益。

大少爷

活性单位U与质量单位ng好像没有换算关系，每种抗生素好像都不一样。。。

hwlightning

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0 i) q# z7 I; h% x0 W7 h4 q# ^4 v/ P" [
活性单位U与质量单位ng怎么换算啊？

vanessa

大少爷 发表于 2012-5-18 22:16 6 E. c5 y7 l( _: x& n
1.我们用久保田的离心机，第一次1500rpm（大概400g），10min，第二次1200rpm，10min，第三次1000 rpm，10mi ...

" n- s( S) G: O4 z第一步我们一般是根据淋巴细胞分离液说明书来进行操作的，一般国产和进口的Ficoll离心力会有所不一样。

hwlightning

回复 大少爷 的帖子+ q8 E9 [9 P; D8 c5 P7 x2 s' V  @  l" i
. o1 y4 x7 d, u; a" a  N
请问下GM-CSF,IL-4和TNF-α国产的就行还是要进口的？能推荐下厂家吗？