请关于PC12细胞的一些问题

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有人用PC12细胞做过实验吗？有些问题请教达人，
2 i9 K8 ~5 \/ Y8 B' B4 j7 s. a1、一般是用分化的还是未分化的细胞做实验呢？
. v9 X. F& K5 H3 h' l2.是不是如果想研究神经元功能的话就要将之诱导为高分化型细胞。
6 f9 J9 L  L2 `1 K+ o3.听说PC12传代次数多了也会分化，还会疯长，那这种分化和NGF诱导的分化结构功能有什么区别呢？$ f' W. \& v9 y5 a8 D
4.NGF诱导的高分化PC12增殖能力怎么样，可以进行RNA干扰等实验吗？
5 c) c* v+ ?0 r# h. @+ o8 L) \; q
谢谢啦 ^^

86964109

看了一些讨论，有点明白了
, X; b/ M  X, U. X2 k% D7 V1.用分化的还是未分化的细胞做实验要看实验要求，好像做药物筛选用未分化的，因为分化后的细胞对药物更敏感。
3 q1 \5 M5 d; f5 A. e2.但又有疑问了，如果我做神经元相关的实验是不是一定要做分化的呢，还是没有答案
/ K! k& `8 S! m" O7 l. s3.国内的PC12有未分化、低分化和高分化之分，但是ATCC貌似只有未分化细胞，国外文章中做PC12分化一般用NGF诱导，Greene LA , Tischler AS . Establishment of a noradrenergic clonal line of rat adrenal pheochromocytoma cells which respond to nerve growth factor. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 73: 2424-2428, 1976. PubMed: 1065897  文章里讲NGF诱导时的PC12没有增殖能力，但会一直分化，停止诱导后分化停止，增殖开始继续。这与国内的高分化PC12细胞株有增殖能力且不弱的说法不一致，而且国内高分化PC12的来源似乎有点不明确，细胞形态也与NGF诱导的细胞不一样。% m# X. w7 X  e4 t5 r- i$ U

8 @7 {+ I4 s, B2 A  [所以又有了新的疑问6 ?) q0 M. s; B; O
a 用国内的高分化PC12细胞株做实验能被杂志认可吗？. v9 d- [; @; }' X: F8 |
b如果不用高分化细胞，因为要做转染，是否必需保证细胞增殖能力呢？如果一定要用有增殖能力且NGF诱导分化神经元的PC12细胞做的话，可以这样设计么：先加NGF诱导至突触形成，停止诱导，恢复增殖，再开始转染？

chentian820

我以前一直做PC12，建议如下：
' A7 ?- g4 O" b7 H  d( E1 国家还是那个通用的只有未分化的PC12，加了NGF后增殖逐渐减弱，长出明显突起，最后几乎停止增殖。  \- z- l* X. _  U  U$ l  ~
2 国内的低分化和高分化PC12细胞是中科院细胞库的。事实上连他们自己都搞不清楚他们这两株细胞是怎么个情况。我以前还电话咨询过，他们就简单滴说:不知道. 令我非常气愤。: s) f/ @4 i7 O
3 我以前也查过是否有用中科院的高分化细胞株发表的SCI文章，截止去年，就只有一篇，而且影响因子很低，可信度就打折扣了。1 b* U1 \! h8 O. R7 }; r. \4 e3 J! T7 k
4 如果你要买PC12细胞株，建议你到武汉的CCTCC去买，他们的细胞株很不错，以前我一直用他们的。; K: _, g$ ]$ b2 |7 Q/ [5 R; X
5 PC12做神经元实验可以用分化的和未分化的。特别是如果你要观察神经突起什么的，就要用分化的。
. h% _; Y4 ~* G* r9 P$ L0 r6 有几个建议你可以参考：1 你为什么不先转染PC12，在做分化，或者筛选出稳转株后再做？2 如果你确实要做神经方面的实验，可以考虑用元代细胞或者神经干细胞。3 SHSY5Y和N2a都比PC12好养，而且也可以诱导分化（诱导因子都比NGF便宜），你可以使用这两株。7 r' @9 I9 r/ ]

86964109

3 R& }2 V4 O* F5 j  b7 p
* A  y4 U2 H; n" v: i# v回复 chentian820 的帖子
5 q/ @% }. h# H+ i9 e
6 h5 }6 q. A6 r4 r$ @- O$ w3 a实在太感谢您的指点啦，是这样的，我想研究氧糖剥夺以及信号通路对于神经元细胞增殖和凋亡的影响，所以就想是不是要在诱导成熟的神经元细胞中进行实验，其实后续实验也没怎么想观察神经突触变化。另外考虑原代神经元细胞和神经干细胞不太好分离培养，就想找个成熟点的细胞系了，看过一篇文献是先慢病毒转染2d再NGF诱导3d的，做的挺漂亮的，不过我想做普通的瞬转，考虑到NGF诱导需要较长时间，担心瞬转会没有效果，又有点局限在一定要在得到神经元细胞基础上做实验，就这么设计了。。。

lhmxm

回复 86964109 的帖子: [+ U5 ?& o3 W; \

: O& r. z6 K5 e% n* A: O文章题目是什么，可以提供一下吗？

86964109

9 T: t5 G- t! |; {7 x8 b( p

& X4 e$ s1 s6 C5 U' R7 z3 s, S回复 lhmxm 的帖子
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碧落

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& \/ \8 T6 E; Y2 z* B7 M$ ~4 I- X$ O$ P
CT!!!!哈哈~

碧落

前段时间用了一阵子PC12，糊里糊涂的用着，后来才知道PC12是可以分化的。后来比对了下，发现我们实验室的应该是分化后的，都是有突起的，细长型的。

86964109

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5 Y- q7 }. K7 v2 p. x你的分化细胞是培养过程中自己慢慢分化的吗，还是加过NGF的，我看到直接培养的分化型PC12好像是菱形的，没有突起

碧落

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! g0 d$ u% b2 U2 s' S0 g# B/ y  N8 c1 p5 V5 [, D  D
额，其实我们的就是普通的培养基HG-DMEM+10%FBS。不用加NGF，可以传代，生长速度也可以的。形态嘛，说菱形也可以，就是有突起的，不是未分化的那种圆球形的。