western blot出现这种结果是什么原因？谢谢

daviddow

最近的试验western blot出现了这样的结果。大家帮我看看是什么原因？谢谢) J- c4 L% g" B) P, p  n; O
1：是不是裂解的时候过长？% I% [$ i, r, b0 r
2：是不是SDS-PAGE电泳的时候电泳液出现了问题？

daiying5200000

曝光没弄好吧

app_1983

不知道你的实验条件是怎样的，一抗是单克隆抗体还是多克隆抗体，单从这张片子看起来的话，感觉跟电泳液的关系不大，像是封闭过程没做好，出现了非特异条带及背景；另外你想要的是哪条条带呢，如果是想要上面的条带，而不是最下面较黑的条带的话，那就有可能裂解的时间过长，导致蛋白降解较多。

innatestem

1.能不能说一下你的裂解条件？
2 Z, g$ f# q( z8 l9 W3 s6 |* Q2.可能与你的转膜条件有关，你用的是干转还是湿转？* h4 W& n1 f  o
3.有可能是你的一抗浓度不太合适。
8 Z0 F% n7 B$ |4.用PBST/TBST多洗一两次。
3 y4 O. b  ^& j9 D7 ?5.曝光的时候控制一下曝光的时间

jackywangzr

由于不知道你的试验条件，不好判断。5 R% p9 }6 ?+ K3 F# O
但是出现这样的条带是不是你用的是多抗啊？？特异性太差。
% C8 h5 P" H8 ?8 D$ i如果以前做过的话建议洗的时候加长时间，加大次数，效果会很好的。

susuloveq

应该是胶没配好

meister

回复 daviddow 的帖子
% r6 ^/ U4 @' U4 y: y. m
% f5 w+ _8 Q; t1 W应该不是抗体的问题，也不是胶的问题。
7 k5 q8 J. \6 l4 W, k& `1 }0 T0 a7 x& ^: {
我估计最大可能是蛋白样本制备的问题。有可能蛋白浓度过高，或者DNA裂解不完全。

懵懂干细胞

2013-9-29 19:02 上传

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你看我的也出现这种情况，开始我没太在意，以为下次蛋白制备，制胶和电泳等严格点就会OK，结果又出现了，" y' D! M$ E" }3 s, ]& U- @1 N9 ?
我现在怀疑的原因有两个，第一：是蛋白浓度过高，第二：是裂解时间或者强度有点过了！
( v4 i  E; L* b: ~" M1 M我准备重新提取下蛋白试一试！ 如果哪个高手遇到此种情况，还望赐教解决方案，省走弯路！

懵懂干细胞

http://emuch.net/html/201010/2445729.html 这是小木虫的一个战友求助的帖子 出现的问题可能差不多，可以参考下人家是怎么解决的# n: w1 _$ r) B( Y7 F! U
如下：
6 d+ ?% k2 c4 W. Q' X' G6 v1 U, p同志们，偶的问题解决了。5 t. M$ X( ^  B# ]; N0 V
1、偶重新配制了loading buffer；
8 C5 S8 ?8 f: U 2、裂解完细胞后取了部分上清做蛋白定量，然后立马加了等量loading buffer
5 ]# P- n2 \) q# i) D 。以前偶都等定量结束才加的loading buffer；6 ~' U2 K( S9 ~- }5 Y1 g% I+ a3 f
3、偶每次上样前，也有离心哦：- P" h4 \" f; a2 I
4、一切程序一定要在冰上进行。

懵懂干细胞

顺便问一下：会不会是没浓缩好啊？