练习小鼠骨髓移植

hyde

想练习小鼠骨髓移植，求高手指教" x7 @2 `/ A+ L" B8 _/ O
1，首先是收集小鼠（带GFP）骨骼，敲碎洗出细胞，过滤，离心。（几只小鼠比较合适）- T: K' q  c' E$ u1 J- h2 o5 S
2，可以直接移植分离的全部细胞吗？应为分选要好多抗体，一时半伙凑不齐？+ z; i4 G+ V! d$ V% e
3，受体小鼠可以不辐照吗（学校的鼠房没有这方面的器材，而且拿出鼠房的小鼠不能放回去的，比较坑爹，有木有药物可以杀死原有造血细胞替代辐照的）
" x( g& J% }4 b& F7 [! Z3 k4，射线的用量不是很懂，半致死量这些是如何确定的？1 ~" C& W  L. {/ }: A0 j6 `
5，一般辐照和移植的时间是如何确定的？; e) j4 h0 R  ]
6，移植多久后比较合适看效果，是不是 可以直接通过血涂片看GFP细胞的比例就可以了？
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chutu

有报道用白消安这种药物也可以起到清髓的作用，当然不如辐照方法经典。骨髓移植时分选出LSK细胞或者全骨髓细胞做供体细胞都可以重建造血，只是细胞量要掌握好。收集骨髓细胞简单的做法是剖出股骨和胫骨，剪掉两端骨头，使骨髓腔通畅，然后用注射器吸取溶液把骨髓细胞冲出来，冲干净后用注射器再把骨髓悬浮液来回抽吸几次，使其分散为单细胞悬液就可以了，最好用细胞筛过滤掉渣滓。

hyde

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4 e, c3 Z! \, p0 L0 T6 m0 F7 C' a" G7 |1 S" x( M5 w
移植后小鼠可以不养在清洁级或者SPF级别的环境中吗？学校的辐照设备在动物房外面，他们规定拿出去的小鼠不能再在动物房饲养。. C: l2 S2 O. q! V
我想问分离的骨髓细胞比较杂，我说的分选是指要不要用造血干细胞的marker纯化一下再移植还是直接全部移植？6 H, B9 o2 @2 B. v
谢谢。

goblinwang

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哈哈，通常移植都是要做清髓辐照的，药物处理，没怎么见过，带GFP的细胞可以直接分选，干嘛要抗体染啊，移植分全骨髓和LSK移植，辐照剂量一般都是9Gy或10Gy,辐照处理4-6小时内移植，一个月后不死算是造血重建成功，" E" l! c: ^; f& j$ ]" }) m
具体的我可以发分参考资料给你，