造血干细胞流式检测结果分析

SKC-SFC

各位大侠，我们实验室目前在做造血干细胞的鉴定。采用流式细胞仪检测，选择的标志物是CD34+CD45+CD133.
- S2 l" c) k1 N! Q方法是：标记去红后，用CD45/SSC画R1门，圈定白细胞-画CD34/SSC双参数图，显示R1门，画R2,-建立CD45/SSC双参数图，显示R2门，画R3门-建立FSC/SSC散点图，显示R3画R4门-回到R1门所在图，选择CD45阳性最强和SSC最大的位置画R5门-重新确立R4门的位置-画CD34/CD45&CD45+CD133双参数的十字门，确定R1门的临界位置来重新确定R3的位置。
/ }4 ?" h; \/ v" K7 }9 F不明白的地方：: D# f) A8 S3 Y0 i
1.CD133的必要性
, o7 R$ @- Y( Q2.最终造血干细胞的统计学数据是R3还是R4的统计学数据？, q% U% o1 H' @4 ~
3.通过R5门来重新确定R4门作用在哪里？' p5 i3 u" B0 w. I  Y, O
4.我的这个实验思路无问题
4 X$ B) R- v- D7 Y' q7 {/ h求各位大侠指点，谢谢！1 V4 a- z7 D+ V: u2 }' [. Y3 @
   

nailute1985

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+ P6 M% u4 v; L( b& w3 G2 I/ ]$ U你们的样本那么不纯的话 结果肯定不准确的。洗涤，裂红这些都需要

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# ~6 h8 j% V3 Q$ e1 e
/ }) h6 H4 _) S我们根据您的说话，又重新分析了，发现结果高了差不多一倍。说明样品还是存在问题。我们的造血干细胞的样本里面含采集液，成分很复杂，估计有不少类似碎片东西。下次实验我们想标记前洗涤几次之后再标记，也许拖尾不会那么严重。

SKC-SFC

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/ Z' W" D, w# D, |- L. D0 a+ R! e7 h/ l) f1 z+ {6 @
这个我明白，我们都是调好的，然后检测待测管，这个没有疑问。但我们的第一管是加了细胞和三种同型对照抗体，这个是作为阴性对照来使用的。用待测管的值减去同型对照的值得到最终的结果.

nailute1985

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6 p0 u' e! S- ?& E# }; M. f* M# C" t8 i! P
调补偿的叫做荧光补偿管，说白了就是一个相对于阳性的阴性管罢了，这个是在实验前就的调好了的

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6 D% i" z' h0 R+ f3 U3 k% Z/ v5 v; Y1 h, P
不是吧。调补偿有专门的补偿管。阴性对照跟调补偿毫无关系好吧。一般以前我们是光细胞做阴对只是考虑了细胞的自发荧光，没有考虑细胞与抗体Fc段结婚，所以用同型对照来排除非特异性的干扰。

nailute1985

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5 C/ I5 w: T+ l+ u
; A. t1 W4 g- D3 F* iR1差不多就是你那个位置，可以再往左来点  觉得你的碎片比较多
1 V0 F  d! C9 x( x1 VR4我觉得你的ssc选的高了，往下来点可以 但是你这个r4分了两个群了明显 倒是可以都画进来 但是ssc一定不要太高

nailute1985

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0 q4 v9 e6 x1 i% p$ L9 X- ?0 r8 d
0.2％也正常的  cd34+细胞百分率不是很多的

nailute1985

回复 SKC-SFC 的帖子" W0 y! J% e7 p

% x( r9 R# K- b) r& `6 c5管没错啊

nailute1985

回复 SKC-SFC 的帖子5 X9 z. u1 T0 _
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晕 阴性对照不是让你调补偿的么，同型对照不是做实验的isotype么