日志
- 分享 PCR问题的总结
- 转自 实验室综合讨论区 pcr产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 pcr反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及活性 ④pcr循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析 研究 。 9 s2 M3 k |1 t; {: f* k1 ...
- 分享 PCR疑难解答
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摘自 上海生工 当 PCR 结果不甚满意时，首先检查以下几方面并遵照执行： 将PCR反应的试管与反应板紧贴。 当酶反应混合物以70℃“热启动”开始循环时，切记在加入酶后稍微振荡一下，因为在0.2-ml的PCR管中不能均匀传热。 不要随意减少dNTP的用量，它是一个系统的因素，必须与其它成份保持 ...
- 分享 Touchdown and SD PCR
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摘自 丁香园 TD以及SD 的PCR程序设定 1.TD的基本操作:根据对引物TM值的计算,确定一个退火温度的大范围(不是一个点而是可以跨越10-20度的温度范围),计算的TM值应该落在这个范围内,让退火温度从选定范围的最高温度开始,逐渐降低温度,每次降低一度,最后结束在选定范围的最低温度,在每一个停留温度上循 ...
- 分享 菌液PCR的经验
- 转自网络： 总结如下： 1. PCR引物的选择 （ 此点至关重要，这也是菌液PCR的独特魅力所在） 选择一个载体上的特异性序列和一个目的基因上的特异性序列作为引物 4 di+ b' D9 _4 _. D6 R5 K 如：pCDNA3.0载体：T7+目的基因-R或SP6+目的基因-F pCDNA3.1 myc his C（只有上游T7无下游SP6）： ...
- 分享 双酶切连接反应的经验谈
- 转自cancer 的个人空间 1、 在双酶切载体时如果2个酶切位点靠得很近，必须注意酶切顺序。因为有的限制性内切酶要求其识别序列的两端至少保留有若干个碱基才能保证酶的有效切割。有的酶要求识别序列两端有多个碱基的，则必须先切，否则就可能造成酶切失败。 2、 回收PCR产物：回收的PCR产物片段=1：10 ，一般取前者0 ...
