外周血细胞分离效果不好

大少爷

以我多年经验，无非这几个原因：1. 细胞分离液质量问题，批次分离液密度不稳定，分离效果差；2. 离心参数设置不当，离心效果差；3. 血液抗凝剂选择不当，一般肝素钠抗凝较好，这个可能性较小。其它的原因都不靠谱。

ET生物人

应该抽完血尽快处理，不要放低温的地方或太久！

momoenn

回复 biluolinyu 的帖子3 ]$ a# R1 T9 L$ C0 `; u2 a
; @/ a. i! J$ V, m1 w% l
Ficoll绝对不能37度预热，或者说不能预热到37度。因为温度会影响密度，我们通常说的密度都是在20°下测的。这也就是看的说明书都要求温度是18-20°的原因

fenlichong

应该就是没恢复到室温，之前有过4℃放置过夜然后将血液和试剂都恢复到室温分离的白膜层也没问题。

免疫与细胞

最好最安全的办法就是再离心一次

biluolinyu

回复 momoenn 的帖子. s0 P# ]+ O7 c
2 h' S2 A/ g* B. o% W# k( ~, G
我有段时间都是直接扔到培养箱里预热的

momoenn

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5 Q1 \( X! E8 V; ]
8 P! v: W* ?8 r3 @+ [额。是从培养箱里拿出来直接用的吗？结果怎么样啊？

994545

白膜只是和上清模糊？  那直接吸了 低离心力多洗一两次就好了。。（看得率）  多次这样的话可以考虑加长ficoll的离心时间，你是多少时间？      

拉二胡的拉尔夫

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$ Z/ {/ t* t6 I0 e' U- t6 p9 S
0 W8 X: l$ V+ m8 D/ {1 f$ H: p我是操作过的，ficoll的核心就是依靠密度差来分离，添加pBS就是破坏1.795的密度。最好是都吸上来，然后添加新的分离液在来一遍。

拉二胡的拉尔夫

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5 i/ E: N% G. J" L  \/ g, K6 Y密度是1.079，打错了