外周血细胞分离效果不好

zhenghua20

  l! {! A7 q- c! l$ L
' p; q: {+ h, v3 |  Q2 H- P血液和ficoll平衡到室温，血液用PBS或生理盐水稀释。另外肝素抗凝过量易引起白细胞凝集。

biluolinyu

回复 momoenn 的帖子0 @/ g9 x( X  }: j5 Z+ q
9 \& `% F1 D# U4 M. S$ c8 Z# ]
挺正常啊。。。。没感觉有什么问题。。。

小沙弥敲木鱼

回复 baby00000003 的帖子
+ n3 u* T( {8 B8 b8 ~" W4 `! y* u! I5 ~8 D# S; B( ]0 {- n6 J
上清液留有所需细胞的可能性大些，不知道红细胞层有所需细胞么，量怎么样

小沙弥敲木鱼

回复 biluolinyu 的帖子
% [" h& ^, c" R+ t
9 i1 z" U2 h* y% T学习了，因为有点懒，FICOLI还没有被预热过，下次试试

小沙弥敲木鱼

回复 拉二胡的拉尔夫 的帖子
! e, E: k3 y$ n$ S0 a4 R+ R, r
$ c, k4 e9 l8 @2 \6 _- y- O" P谢谢了，有一点加大生理盐水稀释倍数这点没看太懂，麻烦给解释下

why77yhw

回复 拉二胡的拉尔夫 的帖子8 L: Z1 i, r+ i3 K' n* {
; a, ^3 n- ]6 b/ N! G2 e7 R% X
需要吸红细胞吗

拉二胡的拉尔夫

回复 小沙弥敲木鱼 的帖子
( a# o* K9 a7 K4 m  D  ?5 Y
* S9 C! A9 ]% W/ l" X5 Y就是将重悬细胞的密度调到ficoll密度之下，这样才能出现鸡尾酒类似的层，重新在分离，否则容易混在一起。

拉二胡的拉尔夫

回复 why77yhw 的帖子
6 i8 ~* d) a+ ^2 o6 s
. w! y+ N1 a/ c吸或者不吸，我都试过，差别不大，添加红细胞是按单个核与红细胞的比为1:100进行的。

Michael_HT

这种情况也有可能是个别血液差异，会有分层不清晰

lccsiais

温度比较重要，血液、Ficol、离心机控温一般设置在20℃左右。不同生产商生产的Ficol使用时要看说明书。血液：PBS以1：1稀释，且稀释后最好立即加样进行离心分离！Stemcell公司推出一种预制好的50ml Ficol离心管，直接加血样离心，细胞直接到出来就可以，因为管子里有一层膜什么的可以防止离心后的细胞混合。一根管据说10几块钱。