CAR-T细胞培养中慢病毒转染的问题

yanxm920

没有遇到过呢

木子小王令

回复 riverdtang 的帖子5 n% _% a/ F! }7 X8 V

/ s  H: t4 ~0 Y! g9 q! t3 g是的，感觉自己还是操作有问题。
; }1 O8 `; S  y是别人给的培养第九天的Tcell，我每孔取了3×105接的。因为以前慢病毒转染时候一般都是在转染时细胞汇合度达30~50%，所以这回转Tcell也想当然的沿用这个规律。8 ^3 V9 a( e7 L; H" O2 Q! ?

7 }  l  ]/ E: G请问你是在Tcell初始分离后就开始用抗体刺激吗？是不是这个时期的Tcell活力比较高呢？（我之前用的Tcell是不是有点老了？）
" w$ a. ^8 d* [; U
! J3 ]% y. i! ~6 a, H* p- _" ]铺板密度如果是10^6/ml，6孔板铺1ml就可以的吧？接种第二天做转染，然后24h后再换液？+ s4 ?2 x8 M; G# ?# n' F

riverdtang

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, o! O: }1 }+ @* j8 x' h' [3 R, X' b# L4 s7 M% e- m2 F
是的，第九天转那效率肯定不会很高的，我们分离就刺激，浓度看你们所需的细胞种类和抗体质量了，这个需要摸索一下，不过你们可以长到第九天还有10%转染率，那刺激可能不是最大的问题，你可以试下分离2-3天转，可能会好些。悬浮细胞不需要铺板啊，直接转就是了，第二天换液。

木子小王令

回复 riverdtang 的帖子. T+ z6 T6 C2 i: L# ~5 a
* x' m6 ~- W! K" {8 F4 }6 a
恩恩！谢谢大神！
4 E1 x" t1 s9 L6 k我下次试着做个梯度，有问题还请多多指教！！！

ET生物人

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: V8 `3 P  m# \3 a4 j+ s# e
# K/ ?6 i4 n8 s$ X- u& C) _% p你们是用什么培养液的？？怎么转染率这么高，我们感染效率一直都很不稳定。

六弦七品

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9 ]# P" W3 g" D8 F; u( G' b( K! s  ^
你们转染效率这么高，我们都用了RetroeNection加polybrene，还是没多少，应该是载体有问题，你们用的那种载体？

六弦七品

回复 winqi 的帖子1 q' f9 }4 D: r& \3 Z

- _+ }/ z  v3 s9 f" ^. d2 a) B用的CMV，最近准备换ef-1a

riverdtang

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0 t: S2 t5 w1 l1 q# h% Y% B/ E7 a& M% ^% R. g  W7 ]" y3 V4 z
启动子试过没有什么明显的差别，还是转染时机影响吧，分离激活后尽早转会好些

jinhaifeng

回复 riverdtang 的帖子. Z3 V. w1 u$ l9 j
! m3 U$ r! d  A( q) Y: c. c( K
请问你们用聚凝胺了吗

只因偶然

回复 riverdtang 的帖子
4 w/ R& O+ ~) L2 q" k/ b# H8 H0 [
* t# [- z: e  ]3 V你们测转染率是什么时候测的？为什么我们养的CAR-T，转染第5天后（转染第2天换液），细胞增殖速度变慢，活性下降了呢