CAR-T细胞培养中慢病毒转染的问题

yanxm920

没有遇到过呢

木子小王令

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$ i8 `. d% H/ U# j是的，感觉自己还是操作有问题。
* D# }: b% p. l+ }3 x. f- `是别人给的培养第九天的Tcell，我每孔取了3×105接的。因为以前慢病毒转染时候一般都是在转染时细胞汇合度达30~50%，所以这回转Tcell也想当然的沿用这个规律。) A& z' K& K, H0 M

/ d6 [! R0 C6 d. i6 P) ]) z请问你是在Tcell初始分离后就开始用抗体刺激吗？是不是这个时期的Tcell活力比较高呢？（我之前用的Tcell是不是有点老了？）
* S: i" u/ g1 w6 g4 I1 @8 t3 Y, r% T$ x, c  t# d6 N  q7 t7 k! B
铺板密度如果是10^6/ml，6孔板铺1ml就可以的吧？接种第二天做转染，然后24h后再换液？' z) Q. q7 z: H* r, _

riverdtang

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$ ?' u( P( f' D. f6 Q) I* S& ~8 p; P3 d% S* D* L' {
是的，第九天转那效率肯定不会很高的，我们分离就刺激，浓度看你们所需的细胞种类和抗体质量了，这个需要摸索一下，不过你们可以长到第九天还有10%转染率，那刺激可能不是最大的问题，你可以试下分离2-3天转，可能会好些。悬浮细胞不需要铺板啊，直接转就是了，第二天换液。

木子小王令

回复 riverdtang 的帖子  a& i1 @3 a+ l! u6 I4 _' O) ]0 U
. j+ }; g4 R" K: s
恩恩！谢谢大神！+ C/ A0 p6 I3 {1 \8 L" W/ b
我下次试着做个梯度，有问题还请多多指教！！！

ET生物人

回复 riverdtang 的帖子& k5 N/ D* V. L! B" Z  \; T- M

1 Z- L5 i8 q/ r% T2 V' X% y" n你们是用什么培养液的？？怎么转染率这么高，我们感染效率一直都很不稳定。

六弦七品

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1 ]* j2 ?/ a1 U- V0 U" l  u
! g" q" z5 w% g  v; R你们转染效率这么高，我们都用了RetroeNection加polybrene，还是没多少，应该是载体有问题，你们用的那种载体？

六弦七品

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* f/ Q# i% T  K6 @- x
9 x$ t2 w" }  z+ Y* b用的CMV，最近准备换ef-1a

riverdtang

回复 六弦七品 的帖子- W& A5 M. r! F$ {9 h
, A9 X0 D# x9 v& p2 ]
启动子试过没有什么明显的差别，还是转染时机影响吧，分离激活后尽早转会好些

jinhaifeng

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8 _0 m8 F1 G( f3 `6 J% j* A/ t% l6 u* y& o* U$ ~/ N
请问你们用聚凝胺了吗

只因偶然

回复 riverdtang 的帖子8 z1 b5 h+ D( s8 B5 }* l7 Y
5 l( u/ E8 b5 J8 x+ C
你们测转染率是什么时候测的？为什么我们养的CAR-T，转染第5天后（转染第2天换液），细胞增殖速度变慢，活性下降了呢