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滋养层细胞问题 [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2016-3-27 10:36 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
尊敬的老师,师兄师姐们:
( S* M# s3 [8 ?( G8 l      我想问一下在铺滋养层细胞后,细胞死亡率特别高,是由于培养基中加入双抗的原因吗?一般滋养层培养液需要加入双抗吗?谢谢
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沙发
发表于 2016-3-27 16:33 |只看该作者
回复 wzm123hzy 的帖子- G% o4 l2 w) S% `

( W1 ]0 V1 p7 p. d8 h我觉得应该不是双抗的原因,有可能是冻存的细胞和复苏过程出现的问题。冻存时一般用含有20%的DMSO,10%-20% FBS的冻存液,用冻存盒进行程序冻存效果比较好;复苏时37度快速融化。
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藤椅
发表于 2016-3-27 23:54 |只看该作者
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5 n1 v2 ^  \/ G5 I; `% q% X# L/ B5 S; B+ X6 E6 {/ y' C
问题没交代清楚,你怎么制备饲养层细胞的?问题的关键点,
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板凳
发表于 2016-3-28 22:02 |只看该作者
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. [, i; K$ J9 @) k4 z5 x9 i# ~$ b5 [5 g& \7 E& X+ I
楼主:
: g* J7 ]0 O; M, K& N8 e     滋养层细胞的制备关键是丝裂霉素的处理,1,如果楼主是铺板后,待细胞长满后处理,这种方法比较稳妥,方便制备大量的未处理的MEF来冻存,解冻后稍微养几天就可以达到需求密度,缺点是周期较长;2,如果是先在大皿中添加MC,然后再冻存保种,然后解冻复苏,这种方式可以快速铺板,但是缺点是会发生楼主的所述的显现,会死很多,如果冻细胞过程有问题的话,密度不好确定!
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报纸
发表于 2016-3-29 11:10 |只看该作者
回复 biovictor 的帖子
4 ^$ Y- R6 i. G- O# c$ M# n  O9 J( \- p0 j; ^7 r1 \4 Q
同意楼上的意见,可能是添加丝裂霉素后冻存再复苏可能会出现上述情况,丝裂霉素的处理会照成细胞死亡,复苏后又会死亡一部分!
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发表于 2016-3-31 09:26 |只看该作者
问题已解决,主要是因为细胞刚复苏,状态不好,加之铺板时没有铺好,感谢老师、师兄,师姐们的热情帮助。
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