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求小鼠胚胎干细胞(E14)无饲养层培养基配方 [复制链接]

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楼主
发表于 2016-3-29 00:24 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
各位老师好,我养的是E14细胞,之前一直都是有饲养层培养的,现在想尝试无饲养层的培养方法,但是我们实验室没做过无饲养层的ES培养,恳请各位老师赐教Protocol,谢谢!
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沙发
发表于 2016-3-29 07:55 |只看该作者
回复 秋槟茗 的帖子& S) e' H. {! j& i0 l& F

) B, h" A4 @9 l% T4 F+ A' f你想要有血清还是无血清的培养条件,有血清条件相对简单,只要你原来小鼠培养液加LIF和GSK3抑制剂就可以维持细胞自我更新。无血清的条件相对麻烦一些,主要是基础培养液比较贵,就是已经被大家用的很多的2I培养体系。
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藤椅
发表于 2016-3-29 09:14 |只看该作者
无饲养层培养现在做的挺多的,之前有同事做IPS的,就尝试了用无饲养层的方法,主要是在瓶底铺上Matrigel,然后再培养~
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板凳
发表于 2016-3-29 09:38 |只看该作者
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回复 abcstem 的帖子. p+ A5 w6 _' G1 g! S
' Y( x" h2 V0 q! u" H. y2 T
老师您好,是有血清的情况下的,恳请说说具体的protocol,万分感谢,,

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报纸
发表于 2016-3-29 09:39 |只看该作者
回复 smile微微笑笑 的帖子
3 U$ R8 p( ^- s+ L* c9 u; H9 D3 G, ~* i+ L$ [8 o( ]
老师您好,不知可否告知protocol,万分感谢,,

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地板
发表于 2016-3-29 09:55 |只看该作者
回复 秋槟茗 的帖子
5 n. }- V  {! k" u# l( d* {& P) E
  n' C/ r7 Y8 X8 B! b% I9 U2 jE14是比较容易养的小鼠ES细胞株,无饲养层细胞条件下,单加LIF不足以维持其自我更新,但同时加3uM的GSK3抑制剂CHIR99021就可以维持其自我更新了。培养液就是普通的有饲养层细胞有血清小鼠ES培养液。培养皿用前可以用0.1%的gelatin包被一下。
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发表于 2016-4-7 08:47 |只看该作者
本帖最后由 秋槟茗 于 2016-4-7 08:50 编辑
# W; d4 F6 b; T1 P  h+ j! m$ j# `# S/ Q- t3 j
回复 abcstem 的帖子! Y: ?8 W5 g. w+ O+ N
  `. O5 m8 K% r  g" x6 N. ?
好的,谢谢,想问问你们CHIR99021用的是哪一个公司的?能否给我一些你们不用饲养层的发表了文章,拜读一下
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发表于 2016-4-7 09:50 |只看该作者
回复 秋槟茗 的帖子+ }% f9 W+ G8 w- p7 b! W% z

3 Y" j! k% k& t- u8 E9 a6 L2 {我现在用的是找人合成的,你可以网上查询一下。应该有不止一家公司卖这个的,象stemgent。GSK3抑制剂促进小鼠ES细胞自我更新的文章已经有很多报道了,你可以查一下应其龙发的一些文章。
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发表于 2016-4-13 21:42 |只看该作者
回复 abcstem 的帖子1 R. x' Q' z5 r; q8 M

2 y  n  q2 t- S4 }3 g4 h老师,您的CHIR99021是用DMSO溶解的吗?浓度?我问了好几个公司都是要用DMSO
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发表于 2016-4-14 10:24 |只看该作者
回复 秋槟茗 的帖子
4 D: @0 X: |8 J- k3 S) a" m! H2 ~
& ?& k5 n5 `; ^# Z& WDMSO溶解的,储存液配成10mM的,用的时候用培养液稀释10倍成1mM的工作液,(这东西单用无血清培养液稀释会析出很多,所以我一般是用加过N2B27的培养液稀释的。)最终1ml培养液加3ul工作液,这样终浓度为3uM。
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