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求小鼠胚胎干细胞(E14)无饲养层培养基配方 [复制链接]

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楼主
发表于 2016-3-29 00:24 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
各位老师好,我养的是E14细胞,之前一直都是有饲养层培养的,现在想尝试无饲养层的培养方法,但是我们实验室没做过无饲养层的ES培养,恳请各位老师赐教Protocol,谢谢!
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沙发
发表于 2016-3-29 07:55 |只看该作者
回复 秋槟茗 的帖子7 p4 i( K* M& G# P* z
' N6 r" f6 N! R2 {; `& i" E( H
你想要有血清还是无血清的培养条件,有血清条件相对简单,只要你原来小鼠培养液加LIF和GSK3抑制剂就可以维持细胞自我更新。无血清的条件相对麻烦一些,主要是基础培养液比较贵,就是已经被大家用的很多的2I培养体系。
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藤椅
发表于 2016-3-29 09:14 |只看该作者
无饲养层培养现在做的挺多的,之前有同事做IPS的,就尝试了用无饲养层的方法,主要是在瓶底铺上Matrigel,然后再培养~
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板凳
发表于 2016-3-29 09:38 |只看该作者
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回复 abcstem 的帖子; e5 k3 o% }$ H1 U  q
, c6 P, M4 F8 r  z; k
老师您好,是有血清的情况下的,恳请说说具体的protocol,万分感谢,,

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报纸
发表于 2016-3-29 09:39 |只看该作者
回复 smile微微笑笑 的帖子
7 Y6 C" Q5 f: c0 p: f$ J) |
9 S9 N/ k) @" U  v# |老师您好,不知可否告知protocol,万分感谢,,

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地板
发表于 2016-3-29 09:55 |只看该作者
回复 秋槟茗 的帖子8 j1 B* v! h# j# E% Q

  A3 V" q9 ^* k( U6 vE14是比较容易养的小鼠ES细胞株,无饲养层细胞条件下,单加LIF不足以维持其自我更新,但同时加3uM的GSK3抑制剂CHIR99021就可以维持其自我更新了。培养液就是普通的有饲养层细胞有血清小鼠ES培养液。培养皿用前可以用0.1%的gelatin包被一下。
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发表于 2016-4-7 08:47 |只看该作者
本帖最后由 秋槟茗 于 2016-4-7 08:50 编辑
' z9 X* j" J) \, q: g5 e, N3 M& @
$ [+ R6 O. G, k5 H8 p3 ~8 _5 M- A" P回复 abcstem 的帖子7 T( {! M% _* Y% F) J# c3 Z6 N! J
# H& o( ]' k5 r, V' i4 u
好的,谢谢,想问问你们CHIR99021用的是哪一个公司的?能否给我一些你们不用饲养层的发表了文章,拜读一下
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发表于 2016-4-7 09:50 |只看该作者
回复 秋槟茗 的帖子: d1 b& f# Z$ C; R! B! ~  G" C. h

8 t0 S( g9 `0 `& \. E我现在用的是找人合成的,你可以网上查询一下。应该有不止一家公司卖这个的,象stemgent。GSK3抑制剂促进小鼠ES细胞自我更新的文章已经有很多报道了,你可以查一下应其龙发的一些文章。
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发表于 2016-4-13 21:42 |只看该作者
回复 abcstem 的帖子
8 v  K/ ]$ H! `) Z/ r9 p8 H8 l+ w" E; x
老师,您的CHIR99021是用DMSO溶解的吗?浓度?我问了好几个公司都是要用DMSO
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发表于 2016-4-14 10:24 |只看该作者
回复 秋槟茗 的帖子
# a% b: ?, B2 G" `) ~: L0 S) W& N  E% o/ L0 f. V7 O/ t& @# B
DMSO溶解的,储存液配成10mM的,用的时候用培养液稀释10倍成1mM的工作液,(这东西单用无血清培养液稀释会析出很多,所以我一般是用加过N2B27的培养液稀释的。)最终1ml培养液加3ul工作液,这样终浓度为3uM。
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