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求小鼠胚胎干细胞(E14)无饲养层培养基配方 [复制链接]

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楼主
发表于 2016-3-29 00:24 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
各位老师好,我养的是E14细胞,之前一直都是有饲养层培养的,现在想尝试无饲养层的培养方法,但是我们实验室没做过无饲养层的ES培养,恳请各位老师赐教Protocol,谢谢!
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沙发
发表于 2016-3-29 07:55 |只看该作者
回复 秋槟茗 的帖子* \0 v9 ?' o, H3 S6 `6 a

/ M' f0 ~5 O7 w( b( Y" J你想要有血清还是无血清的培养条件,有血清条件相对简单,只要你原来小鼠培养液加LIF和GSK3抑制剂就可以维持细胞自我更新。无血清的条件相对麻烦一些,主要是基础培养液比较贵,就是已经被大家用的很多的2I培养体系。
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藤椅
发表于 2016-3-29 09:14 |只看该作者
无饲养层培养现在做的挺多的,之前有同事做IPS的,就尝试了用无饲养层的方法,主要是在瓶底铺上Matrigel,然后再培养~
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板凳
发表于 2016-3-29 09:38 |只看该作者
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回复 abcstem 的帖子
8 ]( _7 u9 T5 ?3 u  U( g6 N0 y; r+ f* G
老师您好,是有血清的情况下的,恳请说说具体的protocol,万分感谢,,

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报纸
发表于 2016-3-29 09:39 |只看该作者
回复 smile微微笑笑 的帖子
3 W! H3 k$ H3 `/ a" B5 ?( f* J. L* q/ _% L  U7 f! [
老师您好,不知可否告知protocol,万分感谢,,

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地板
发表于 2016-3-29 09:55 |只看该作者
回复 秋槟茗 的帖子0 U# W2 E, k; X7 m9 c+ S
! b  d9 F$ W  L" k
E14是比较容易养的小鼠ES细胞株,无饲养层细胞条件下,单加LIF不足以维持其自我更新,但同时加3uM的GSK3抑制剂CHIR99021就可以维持其自我更新了。培养液就是普通的有饲养层细胞有血清小鼠ES培养液。培养皿用前可以用0.1%的gelatin包被一下。
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发表于 2016-4-7 08:47 |只看该作者
本帖最后由 秋槟茗 于 2016-4-7 08:50 编辑 : ]" A: Q% ~8 @: r  g
, k3 W  \5 G, M1 T
回复 abcstem 的帖子$ `0 }; \1 C3 v4 P7 B: V

$ G; W2 c# D; F! \好的,谢谢,想问问你们CHIR99021用的是哪一个公司的?能否给我一些你们不用饲养层的发表了文章,拜读一下
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发表于 2016-4-7 09:50 |只看该作者
回复 秋槟茗 的帖子
1 f& {1 q- Y6 R  a, p! |" m$ k, z, I
我现在用的是找人合成的,你可以网上查询一下。应该有不止一家公司卖这个的,象stemgent。GSK3抑制剂促进小鼠ES细胞自我更新的文章已经有很多报道了,你可以查一下应其龙发的一些文章。
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发表于 2016-4-13 21:42 |只看该作者
回复 abcstem 的帖子$ g7 v4 o' q9 D( s+ @* W6 c

1 z% w7 m- J. D9 G7 }  r; r5 ^老师,您的CHIR99021是用DMSO溶解的吗?浓度?我问了好几个公司都是要用DMSO
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发表于 2016-4-14 10:24 |只看该作者
回复 秋槟茗 的帖子3 w) s! z1 C1 T  a0 I. a
+ C% u2 `+ |3 g. m5 Y
DMSO溶解的,储存液配成10mM的,用的时候用培养液稀释10倍成1mM的工作液,(这东西单用无血清培养液稀释会析出很多,所以我一般是用加过N2B27的培养液稀释的。)最终1ml培养液加3ul工作液,这样终浓度为3uM。
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