脐带组织块培养法，原代传代i后第三天的细胞

罗裙漫紫蝶香

脐带组织块培养法，原代传代i后第三天的细胞，传代方法是，用移液枪吸走组织块，PBS清洗2边，酶消化，可是第二天细胞大部分都死了，只有很少部分贴壁，且已经铺展开来，分不清是不是间充质干细胞了，下图是继续培养至第三天的细胞
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yingfeixiang

怎么这个样子呢？你是不是胰酶消化时间太长了细胞死掉了，长的不好接种密度也有要求的，太少不行，你按多少接的

罗裙漫紫蝶香

回复 yingfeixiang 的帖子* @; d5 g5 {* t) P% A. W" J* g

$ T2 H2 X! Q% Z/ {- A) V我没有计数，有4-5个集落种到6cm的皿中，显微镜下看密度也不稀

田甜

亲，这是你上个帖子中原代细胞传下来的不？在你之前的那个帖子里，我建议你传代后换培养基：按你的图片，你的脐带间充质干细胞已经开始衰老了，传代时不换培养基的话，会继续衰老下去，就像你现在这个帖子发出的图片一样。. B: b; a/ h/ s! I) U
下次你再做原代的时候，注意血清换好一点的，一般还能养到P5/P6代，形 态不错，血清不好的话，影响很大的，没有选到合适的血清，就挑选一款合适的无血清培养基或是间充质专用培养基，国产的也行的。! D7 B6 @4 q2 d  D) J* Z! L
合适的生长时间：原代生长时间11-15天，传代后3-4天能汇合至90%以上。

罗裙漫紫蝶香

回复 田甜 的帖子4 V7 C% B" N$ n

. W! O, Z* t) t9 c' U亲，眼力真好，是上次那个帖子里的，我用的培养基是间充质干细胞的培养基，而且之前用来养过多种间充质干细胞，效果都好的，而且我要无血清培养，所以就没换，现在就养不起来了

yingfeixiang

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) v( o; \' \" g4 C' r( o' _* g# h
7 I% ?9 d8 G7 I& c: @) ]5 [8 g! f这个的按密度接种，你不计数不太好。个别可能因为个体差异导致长的不好，其它都应该长的很好

晗晗

亲,这细胞都衰老死啦,建议还是别要拉,扔啦把

罗裙漫紫蝶香

回复 晗晗 的帖子+ ^8 ?, I$ V7 c! f

& L( i3 e6 Q8 \6 j今天第四天，已经长满了，我传代了又

罗裙漫紫蝶香

回复 田甜 的帖子' }4 [, G+ Y: {+ S
+ W4 f: m" o9 A8 z4 r4 N! ^
这是P2代的，感觉比之前的状态好啊
+ ^: N3 _- z4 s2 L' B, n/ o

pcljsw2008

第一张图老化感觉严重，第二张又好点，第三，四张基本正常，可能是密度有点低，胰酶浓度有点高