关于T细胞培养扩增

nailute1985

最近培养外周血分离的PBMC扩增T细胞的时候，一开始t细胞生长状态很好，形态也是活化的形态，抱团也比较多。我们就是OKT3刺激之后常规添加IL2，大概48h补加一次，维持密度1*10^6/ml，但是发现细胞总是在D8天左右的时候从活化状态回到那种球状的静息状态，进而开始有细胞凋亡发生，增殖明显受到抑制，撑不过D10左右，细胞就会挂。我感觉应该不是个体差异问题，但是经过lentivirus感染后的T细胞，培养条件不变，生长状态却出奇的好。请问大家有没有遇到T细胞D8天左右凋亡的情况出现？如何解决？谢谢

xieyun20052005

细胞活化没问题的就是后期扩增培养基的营养成分不行，是不是活化和扩增的培养基也不相同呢，可以适当调整扩增培养的成分，增强其扩增营养成分。

niliu730323143

这跟你的培养基有关，如果只是用普通培养基，不加细胞因子根本养不活。我用GIBCO AIM V，加500IU rIL-2可以培养12天以上。但是细胞增殖并不快。

nailute1985

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: f. `( T1 d( D4 [+ c8 p& l. r6 }( m; i6 V* D) w1 l0 G  i
我用的x vivo 15加了HSA

nailute1985

回复 niliu730323143 的帖子% B4 ]5 I0 d9 Y" J0 Z

' p0 y* _+ u# J1 Y2 l5 t扩增倍数有多少？我初期还是可以的就是D8左右细胞形态就变回球形了，增殖也慢。你们是在孔板养还是flask？

niliu730323143

回复 nailute1985 的帖子- m5 ?/ K9 Z0 [2 n5 {

: G: r- o* J; @2 N. I24孔板，然后转移到6孔板。

niliu730323143

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OKT3刺激有什么作用？

niliu730323143

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5 o' V# ?$ B/ f! l: ~# ~一般来说，应该用PHA和IL-2来培养的，或者CD3/CD8加IL-2养的，反正我现在已经一头雾水了。

niliu730323143

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" K, K, G1 C! n, M. d一般来说，应该用PHA和IL-2来培养的，或者CD3/CD8加IL-2养的，反正我现在已经一头雾水了。

nailute1985

回复 niliu730323143 的帖子. ^7 ?: m# t* d! j4 @; |

% y) i/ y8 k1 `0 Z: R! QOKT3是一个抗体，可以跟TCR-CD3抗原复合物结合，激活T细胞信号通路，只有激活T细胞的信号通路，T细胞表面才会上调IL-2受体，才能跟IL2结合，活化JAK／STAT信号通路，细胞才能增殖。