WB实验结果这样，怎么回事？

未来之星

什么原因造成这样的结果？

2016-12-5 13:46 上传

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zhu1019

胶没有凝好，或者你上样量太大，导致样品溢出空外了

zhenghua20

多半是制胶的问题，建议跑两块蛋白胶，选一块先考染一下，确定电泳没问题了，另一块再进行转膜和抗体的孵育及曝光等步骤。

qinchuanniu

你做的是连续电泳还是不连续电泳，权当不连续电泳来分析，如图中所示是浓缩胶与分离胶的界面，样品完全没有进胶，原因1、分离胶胶比相对于被分离样品太小，降低胶比增加凝胶孔径如从10-15%降为6-8%或更低；2、如胶比合适，问题就出在制胶的过程中，AP或TMED加量太多，聚合时间太短造成凝胶孔径大大低于预期，聚合时间过长凝胶孔径会会高于预期，为保证实验的稳定性和可重复性，一般聚合时间应控制在37度下、45min左右；3、制胶时所用的试剂或电泳液pH或离子浓度出了问题，重新配置。

sports123

不知道你事先有没有验证一下你的抗体，如果抗体不合适的话也会出现这种现象。

optimus

应该是胶的问题，凝胶的时间，缓冲液的pH值，还有其他方面的东西都多检查一下嘛。
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未来之星

统一回复：谢谢各位大侠指点，再试一次

sfnana

多半是胶的问题，凝胶不好，检查一下制胶的的试剂。做个对照。