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各位大虾好 小妹最近在用流式分选SP细胞 我们用肺癌细胞系做的 总是出不来典型的图 而且荧光染色强度很不均一 后来取小鼠股骨做了一次 基本上出来了 但是后来用细胞系还是做不出来 我用的是细胞系是肺癌SP-C 已经做了好几个月来 不出结果 万分着急啊: R& z3 r8 p4 I/ T) b5 ~7 Q
我的步骤：
~! X% R# {5 s0 j2 I! ~1.0.25%胰酶-0.02%EDTA消化细胞 ! h" L# d5 `. f ?( f& l
2.终止消化 离心% @9 o9 X1 b* n4 V5 T% t: F
3.将细胞重悬于37度预热的2%FCS+10mMHEPES的DMEM培养液中，调整细胞浓度106/ml" X" P; \ w5 J9 @5 h9 n
4.对照组加入50 umol/L 维拉帕米
5 |% a, Z$ X: _# {+ S r5.10min后 两组同时避光加入5ug/ml的hoechst 37度孵育90分钟 每隔隔15分钟振荡一次
* w `3 t+ Q- g j; Q（孵育是在孵箱中进行的）- c2 n9 n5 S; |8 ` O" f
6.孵育结束 4度离心1000转*10min（后面操作均在冰上进行）
: s0 k( b) i; i3 j U7.将细胞重悬于冰的2%FCS+10mMHEPES的Hanks液中/ G: e) O; S1 s- ^+ ?7 D; A
8.滤网过滤 上机
9 _- r: p, X# ] r: m, ^请大家帮忙分析一下 万分感激
; s, ^" j& g" j0 |; ^) aPS：之前细胞培养于玻璃瓶，后来改用塑料平皿培养，结果比以前明显进步 但是还是没有典型的拖尾的图 |
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发表于 2009-6-15 14:01
发表于 2009-8-13 13:50
