MEF复苏后不贴壁的原因？

泡沫清风

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* _, F% n, A$ [: `  |. R
我总结下上面的啊：
3 _" @3 H) e# S. h, g# O- U一：查一下是不是冻的问题或者复苏的问题：用苔盼蓝计数，看看活细胞的比例  j" x2 d+ A% ~9 ~
二：你的瓶子是不是新的，是玻璃的还是塑料的（新的和旧的，玻璃的和塑料的相差很大的哦！）。
4 B9 M8 s1 j  F. {6 c三：预铺一下Gelatin试试看（但是我觉得Gelatin都是要把Es往mef上铺的时候才处理的）

痞子的烟头

建议你用42度复苏，还有养MEF最好用20%血清，不用加NEAA！
1 `6 n* C6 R  b; _8 T4 h0 j我想你细胞可能的原因，一是你冻存时有可能存在问题，DMSO等对细胞损伤厉害
) X7 `3 t9 p0 y; Y: ?: U如果情况还是这样，你可以试着加0.01%ploy(LYS) 检测下是不是细胞的问题？

zpzp0312

要是冻的问题，那就没办法了4 A7 m+ X5 b7 i- _7 b* H, _
telomerase 发表于 2009-6-18 14:27

% }4 l1 O; n! @1 j/ L* \嗯
2 }7 X$ P! x# p  s& U( S) ^如果是由于冷冻造成的细胞死亡。" @0 l7 i" X( r) F1 s6 F' V
建议将冷冻方法优化一下！

nmnannan

谷氨酰胺要2周加一次吗？养MEF时候。

nmnannan

谢谢大家

cortex

应该铺上明胶，0.1％到0.5％都行。
& N0 E. E- p& o/ C2 p我买过，从atcc公司的，按说明书培养，应该没什么问题的。2 q! M% x/ A  D& A
说明书饲养配方是：培养基：DMEM（Gibico高糖）+15%FBS（Hyclone）＋L-glutamine－NEAA＋双抗* r1 J( K3 M& b* t9 s/ q1 ?$ }
祝好运！

cortex

而你的细胞不贴壁，看来问题可能主要还是在细胞上。你可以看看你的悬浮的细胞发不发亮，如果不发亮的话，估计是你冻存的问题了。

have-a-rest

CF1原代，09.3.19。显然是买回来的，国内就没有这种老鼠。
, B1 M8 u& h1 c如果你是严格按照说明书操作的，那也许就是运输过程出了问题，或者拿回来后没有保存好。即使不铺明胶，即使培养基不太合适，这种细胞也不可能一点也不贴壁。所以，我觉得细胞在铺到瓶子里之前，已经基本全部死掉了，阿门。索赔吧！如果还有没解冻的，可以叫代理商技术员前来鉴定。这种细胞还是有点贵的，500-2000元/支。

nmnannan

最后还是没有找出原因，卖方已经同意赠送等量细胞了，再试试看。感谢大家！欢迎大家继续交流！

yaner

这个培养基不用加NEAA，铺板前不用GELATIN，但是原冻存液中的DMSO一定要除去，否则会影响细胞存活，