MEF复苏后不贴壁的原因？

nmnannan

第一天 复苏CF-1 MEF 原代 （09.3.19）7 R- O7 k! T- G+ r" i. D. U
   完全培养液MEM（含双抗，L-GLutamine,） 百分之十血清 ,百分之一的NEAA
0 J8 v" T0 ]7 d7 v   液氮中取出后，37度摇晃约1分钟，移至含有5ml完全培养液的瓶中（带透气膜），37度，百分之五的CO2培养箱中。
6 k. s  F0 @( S& Q0 y   第二天  24小时后几乎没有贴壁细胞。离心后重新培养
' ?7 N6 |0 k& N$ G" H3 V+ R  第三天 仍未见贴壁细胞
$ r2 f, ~. C; q8 K) `4 H5 `   您能帮我找出一些原因吗？希望您能在百忙之中帮助我！谢谢！

nmnannan

第二次复苏经历：2 F2 ^" ^& }1 ~2 [% _
1 [) h- X% v, f! I; W: n$ ~
离心后培养，转天还是不贴壁。。。
  G; v. E4 X5 T& ^& H6 \2 H什么原因呢

hualin840518

泡沫清风

用的是新T25瓶子吗？

饶冠华

建议你复苏的时候用台盼蓝染色 看看活细胞的比例  我觉得有可能是你冻存的时候出了问题   如果确认了复苏之后活细胞比例很大的话  建议把复苏时血清浓度增加到15%~20%

telomerase

虽然没亲手养过但见过4 z7 j7 `, t' p! l6 v
MEF  铺之前，板子要用Galtin （评的？）包被的

饶冠华

另外，原代细胞就是冻存后存活率相对低，所以冻存的时候细胞密度一定要大  至少10^6/ml冻存密度

泡沫清风

虽然没亲手养过但见过
( k5 X& X. R) f' AMEF  铺之前，板子要用Galtin （评的？）包被的
* O7 g, l1 i8 K# b  ?telomerase 发表于 2009-6-18 14:23

/ v3 P4 S; {/ Q9 y# U+ t
老陈在养的时候瓶子里没有加Gelatin

have-a-rest

首先准备培养皿/瓶，铺上0.1%的明胶30min以上；
0 S- d2 o# [, K2 u. e7 {- H解冻后用5-10ml培养基重悬，离心1000rpmx5min；# S( y' s& f, N9 _0 l: q1 i8 ^
铺板。
9 M* H$ d1 ~# F2 u# a& D/ \培养基：DMEM（Gibico高糖）+10%NCS（小牛血清，Hyclone），双抗。
4 j- G6 b1 m, f8 u# P如果是ATCC购买的，严格按照说明书操作。/ }3 {& e% u: n; Z
祝顺利！

telomerase

要是冻的问题，那就没办法了