MEF复苏后不贴壁的原因？

nmnannan

第一天 复苏CF-1 MEF 原代 （09.3.19）
5 x, [* U- Q$ c- t& J9 T   完全培养液MEM（含双抗，L-GLutamine,） 百分之十血清 ,百分之一的NEAA
' L: H3 |+ s1 x   液氮中取出后，37度摇晃约1分钟，移至含有5ml完全培养液的瓶中（带透气膜），37度，百分之五的CO2培养箱中。
0 G& X0 [+ @5 d3 y   第二天  24小时后几乎没有贴壁细胞。离心后重新培养
$ r9 q$ T4 a1 E+ ?, `4 M9 Y; O  第三天 仍未见贴壁细胞
9 Y" _8 j3 A4 L  Z   您能帮我找出一些原因吗？希望您能在百忙之中帮助我！谢谢！

nmnannan

第二次复苏经历：
& f9 K7 D8 E( D# u0 N6 p  T- ^+ u0 e. e6 A) i% [
离心后培养，转天还是不贴壁。。。. V" a/ k- W; n% Q: O3 R# K" C
什么原因呢

hualin840518

泡沫清风

用的是新T25瓶子吗？

饶冠华

建议你复苏的时候用台盼蓝染色 看看活细胞的比例  我觉得有可能是你冻存的时候出了问题   如果确认了复苏之后活细胞比例很大的话  建议把复苏时血清浓度增加到15%~20%

telomerase

虽然没亲手养过但见过% p; g3 d2 Q7 e, X) a
MEF  铺之前，板子要用Galtin （评的？）包被的

饶冠华

另外，原代细胞就是冻存后存活率相对低，所以冻存的时候细胞密度一定要大  至少10^6/ml冻存密度

泡沫清风

虽然没亲手养过但见过! F( ]" l# A! S! a& D) k
MEF  铺之前，板子要用Galtin （评的？）包被的6 \6 z: c) R9 e1 `6 p
telomerase 发表于 2009-6-18 14:23

) e. g6 I2 p  y/ q1 u: }
老陈在养的时候瓶子里没有加Gelatin

have-a-rest

首先准备培养皿/瓶，铺上0.1%的明胶30min以上；
2 |" O' Q2 u1 c# y) F解冻后用5-10ml培养基重悬，离心1000rpmx5min；
4 s9 g" m; Y' e2 L* E( W. ?+ d铺板。
6 c" Y8 F: [( G3 X% Y培养基：DMEM（Gibico高糖）+10%NCS（小牛血清，Hyclone），双抗。( S' p" g2 |9 q3 U
如果是ATCC购买的，严格按照说明书操作。
; k% T/ g7 A$ ~' N: b祝顺利！

telomerase

要是冻的问题，那就没办法了