MEF复苏后不贴壁的原因？

yaner

在室温状态下，细胞在ＤＭＳＯ中越久，死亡率越高

xionghao508

原因应该在三方面：第一，冷冻前你有没有检查细胞的活力；第二，复苏后的培养基条件（包括血清）是否与冷冻前一致；第三，复苏后的密度是否大，至少不能低于5*10^6。) J( G- n6 [# d
我们实验室的冻存MEF一般复苏都很好，其它的没有什么技巧性，关键是我们复苏的密度很大，我基本是10^7—10^8个/ml，所以即使死的细胞多，复苏率低得很，但是我的复苏密度高，最终总能长起来，这是我的一点经验，希望对你有所帮助！

随风的天使

应该是你冻细胞的时候出了问题，我做培养时100mm的皿冻存六只2毫升冻存管内（含1毫升冻存细胞悬液），解冻时解冻在60mm皿中，隔天就长满了。) w7 S/ @7 W4 s  X) l
你冻存时的时间要严格把握：4度30min;-20度最少两个小时，最多过夜，主要目的是要使细胞冻实。-80可以放几周，然后放于液氮中长期保存。
9 b$ C* n& |" t7 }冻存液要混匀。

yunxinxu

应该是冻坏了！

大漠

我觉得是冻存时出了问题，你用台盘蓝染色后看有多少活细胞。

大漠

我觉得是冻存时出了问题，你用台盘蓝染色后看有多少活细胞。

friendly0722

我也遇到这个问题，经过分析有两种原因，一是你冻存过程中的问题，例如冻存液，冻存时的细胞状态，还有就是你在冻存过程中是否细胞有时候没有在液氮中浸没（我的问题在这里），二是你冻存细胞的密度。估计以后你解冻同一批时候也有这样的问题，如果试验比较重要，最好抓紧时间重新做一批MEF。

yaner

最好离心，去除冻存液后在过夜贴壁，因为DMSO在高温下会影响细胞的存活

nmnannan

感谢大家关注，并给予意见和建议！确实是冻存或者运输的原因，这批细胞是我购买的，复苏后都不贴壁，后来要求卖家再寄来一批，结果就好了！谢谢大家！

认真

不知道是不是因为复苏后没有离心的关系?