一个片段想要删掉18个碱基有没有什么好办法？ - 实验室综合讨论区干细胞之家

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楼主

发表于 2017-3-1 08:58 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

扩增出一个高GC含量的片段后，连接到了T载体上，现在想将片段中一段18bp的碱基删去，也就是突变掉，大家有没有什么好的建议？

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沙发

发表于 2017-3-1 09:34 |只看该作者

额，先P下来了设计引物了做突变了再连接上去？

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藤椅

发表于 2017-3-1 14:23 |只看该作者

现在就是在删除的片段的两端设计引物，把整个质粒PCR出来，然后加连接酶连接，再转化，但是由于GC含量太高，每次测序出来的要不就是删多了片段，要不就是删了18bp,但是有移位，改肿么办？

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