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NK细胞培养过程中,用血清代替血浆有关系吗?  

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发表于 2017-3-27 14:14 |显示全部帖子
我们做的NK细胞培养,所用的原细胞为2-4天之前所提取的单核细胞,无血浆,因此用血清按血浆灭活步骤进行处理,用血清代替血浆。3-4天乃至1周后后显微镜下整个视野里细胞数目极少,几乎为个位数,这些是什么原因呢?
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发表于 2017-3-27 15:07 |显示全部帖子
你说的逻辑有点混乱啊。你的血清是从哪里来的?动物的?如果是动物的,就按照使用说明书使用就可以啊,没有问题,可以替换。- M2 c8 u- O( e4 c
没有培养出来细胞可能你的血清有问题,也有可能操作不对。
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发表于 2017-3-27 15:15 |显示全部帖子
回复 免疫与细胞 的帖子1 t+ T  }' C* o
/ ]9 Q3 z' U) a! r: n
补充一下。血清是买来的;单核细胞是抽的其中一个人血液提取的;由于当时没有工具,所以就没有再次抽血分离血浆
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发表于 2017-3-27 15:15 |显示全部帖子
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回复 免疫与细胞 的帖子# _: ]: U# R: `& V

% ~0 x$ ~6 |* C/ ~% S9 }血清放56度灭活,看到一点点絮状物,最后看到的细胞特别少

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发表于 2017-3-27 15:19 |显示全部帖子
本帖最后由 免疫与细胞 于 2017-3-27 15:20 编辑
$ x" P0 ?# e7 t+ B1 I. x0 q, ^; L: R  O/ B* P, B
回复 爱学习的青年 的帖子* z: h9 ]% L$ `  E6 T5 r7 H

& n5 M2 l" a% B- u% i9 \2 ^不用再抽血分离血浆啊,直接用提取单个细胞的血提血浆,先离心分离血浆,在用DPBS稀释血液,加到淋巴细胞分离液中分离单个核细胞
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发表于 2017-3-27 15:20 |显示全部帖子
回复 爱学习的青年 的帖子, i: `8 E  w2 f4 {- v" b; E
, o. W/ [4 N0 l: k
血清处理的没问题,估计血清本身有问题。
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金话筒 优秀会员

发表于 2017-3-27 15:29 |显示全部帖子
我们做的NK细胞培养,所用的原细胞为2-4天之前所提取的单核细胞?这句没懂,2-4天前的细胞还养?
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发表于 2017-3-27 15:33 |显示全部帖子
回复 gondobar 的帖子! ?9 s: ^" l& o& U$ h
. d+ G0 L8 V3 @% l; K
比如在“今天”做单核细胞的提取,然后直接冻存了,3天后复苏这批细胞今天NK培养。没说清楚
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发表于 2017-3-27 15:36 |显示全部帖子
回复 免疫与细胞 的帖子" {% V6 J* ]$ ]  M

$ ~1 `6 |* [3 Z! y) T那天老师给我们一个新方法提取单核细胞与常规方法提取单核细胞,最后对比两种方法提取的单核细胞纯度,最后血浆上清让我们扔掉了,后面没想到要用这批细胞培养NK
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发表于 2017-3-27 15:38 |显示全部帖子
是动物血清吗?一般动物血清是否要灭活要根据购买的血清说明书,很多是不需要灭活的。建议还是用自体血浆,分离获得PBMC之前,先高速离心获得自体血浆,将自体血浆56℃灭活30min,高速离心去掉凝集的纤维蛋白原等絮状沉淀,即可添加到NK细胞培养基中,增殖效果明显!
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