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NK细胞培养过程中,用血清代替血浆有关系吗?  

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发表于 2017-3-27 14:14 |显示全部帖子
我们做的NK细胞培养,所用的原细胞为2-4天之前所提取的单核细胞,无血浆,因此用血清按血浆灭活步骤进行处理,用血清代替血浆。3-4天乃至1周后后显微镜下整个视野里细胞数目极少,几乎为个位数,这些是什么原因呢?
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发表于 2017-3-27 15:07 |显示全部帖子
你说的逻辑有点混乱啊。你的血清是从哪里来的?动物的?如果是动物的,就按照使用说明书使用就可以啊,没有问题,可以替换。
% c# F7 h% ]- M% s没有培养出来细胞可能你的血清有问题,也有可能操作不对。
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发表于 2017-3-27 15:15 |显示全部帖子
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% w. ]/ f. E6 f4 ^
  S' }; q7 v0 s  [/ ?. f补充一下。血清是买来的;单核细胞是抽的其中一个人血液提取的;由于当时没有工具,所以就没有再次抽血分离血浆
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发表于 2017-3-27 15:15 |显示全部帖子
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. E" i3 N  M% U
& D4 v9 i8 L' T/ M血清放56度灭活,看到一点点絮状物,最后看到的细胞特别少

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发表于 2017-3-27 15:19 |显示全部帖子
本帖最后由 免疫与细胞 于 2017-3-27 15:20 编辑 ' A1 U4 k* E) y6 M) t

# i* Z' z$ w1 d$ v  s回复 爱学习的青年 的帖子
. }' k1 p+ V6 F% e& k8 L  c
) T5 p% g$ ?3 e& H. h不用再抽血分离血浆啊,直接用提取单个细胞的血提血浆,先离心分离血浆,在用DPBS稀释血液,加到淋巴细胞分离液中分离单个核细胞
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发表于 2017-3-27 15:20 |显示全部帖子
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: t' `1 y3 q- H- P3 {
+ P6 I8 H. z1 h; i6 E. f血清处理的没问题,估计血清本身有问题。
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金话筒 优秀会员

发表于 2017-3-27 15:29 |显示全部帖子
我们做的NK细胞培养,所用的原细胞为2-4天之前所提取的单核细胞?这句没懂,2-4天前的细胞还养?
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发表于 2017-3-27 15:33 |显示全部帖子
回复 gondobar 的帖子  U( i: G* O& L5 [, v

( }6 c2 Z4 C  M比如在“今天”做单核细胞的提取,然后直接冻存了,3天后复苏这批细胞今天NK培养。没说清楚
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发表于 2017-3-27 15:36 |显示全部帖子
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! F* L5 j0 M6 w. S; E0 v! _6 |
) _0 f1 |. N6 E9 c% g8 R& }那天老师给我们一个新方法提取单核细胞与常规方法提取单核细胞,最后对比两种方法提取的单核细胞纯度,最后血浆上清让我们扔掉了,后面没想到要用这批细胞培养NK
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发表于 2017-3-27 15:38 |显示全部帖子
是动物血清吗?一般动物血清是否要灭活要根据购买的血清说明书,很多是不需要灭活的。建议还是用自体血浆,分离获得PBMC之前,先高速离心获得自体血浆,将自体血浆56℃灭活30min,高速离心去掉凝集的纤维蛋白原等絮状沉淀,即可添加到NK细胞培养基中,增殖效果明显!
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