外周血单个核细胞分离完有红细胞

lybai

我们的主要操作步骤：1 `1 _# Z+ \6 ^& F7 L
1 10ml全血用10ml 1640培养基稀释，轻轻混匀
9 `* y! [7 v5 y, ^9 p2 稀释的血液20ml缓慢加到20ml淋巴细胞分离液（Gibico）上。1500rpm/min, 30min,0 f2 b: H/ p& B+ e* Y
3 吸取白膜层，然后1:1用PBS洗。2000rpm/min, 10min,
' C1 N3 j9 c2 I! n! `* t0 g4 弃上清，再次加20mlPBS，吹散细胞，2000rpm/min, 10min
- A* S, J" E9 d  y( j5 最后加2ml PBS,计数。2 `) U' z% ^0 D4 }& P
& G" l1 Y& S: ?5 k* l8 H

& k, m6 ~7 Y' ?% g( T1 ~3 x5 b: `细胞悬液离完心即可看到底部有明显的红色沉积，显微镜下也能看到红细胞，求教各位大神，
/ |9 ?# j# \# }1 L) P' u3 L1 我们第一次离心的时候，转速是不是有点低，我查了一下，我们的转速相当于400g离心力，其它有的人用800g,或2000rpm，我们也试过500g离心，离心完之后，细胞很难吹散。
6 ^! J0 n2 ?5 h1 }1 u+ C' d2 稀释血液和淋巴细胞分离液的比例，我们用的是1:1，看别人用2:1~3:1,这个对试验影响大么？

niliu730323143

用得是什么牌子的离心机？

lybai

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( X. B# f$ Q( U0 G/ K3 ?用的湘仪的, _4 Y3 v" m# B/ c

niliu730323143

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9 ?! r, v% E: ]' L$ p/ w# j2 I  ^/ {
减速的时候离心机的振荡导致分层混乱了，建议用stemcell特制的分离管，这样就不用换离心机了。

lybai

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( n2 m: O. z4 e* p8 [; I9 [0 R, [" P5 j  T$ I' O- R8 @
我们离心的时候，减速设置的是0

lybai

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. N# J. T: P# V6 ]7 n6 v, L  B& m
离心完成之后，分层还是很明显的，白膜层很清晰

niliu730323143

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! M/ C5 \# m4 Z3 X. N
我们也遇到这种情况，所以，信不信由你

lybai

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. T/ A- K/ n' Y8 o" m* E1 Y3 F7 N5 Y3 H谢谢您提供经验，我们到时候也试试

cellprobe

红细胞是在所难免的，可以加红细胞裂解液去除。如果不加红细胞裂解液，红细胞也会慢慢的自动破裂。

Diane0321

1 我也在分离单个核细胞，我的离心速度只有1800rpm，20min，加减速度为0，但是我的血样比较少，一般只有2-3ml，离心后有明显的白膜层，在此离心后也是有部分红细胞，所以我们一般都会按1：4加红细胞裂解液进去，室温作用5min，这样基本就没有红细胞了。, J* z$ {8 a4 U" K8 U9 F
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2 稀释血液和淋巴细胞分离液的比例，我们用的是2:1，也试过1：1，感觉没什么影响+ U6 y# u2 e. h3 w1 ?
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