为什么细胞传代后莫名其妙的不贴壁

fenglinzhu

同事培养的骨髓干细胞，传代之前长得好好的，传代后第二天观察细胞贴壁量少，大量细胞悬浮，而且形态状态不佳。换液后无漂浮细胞，等第二次换液前观察又有大量漂浮细胞，同时贴壁细胞缓慢减少。一开始以为是他消化过头导致细胞活力差，换人操作后还是会出现这样的状况。不知有没有大神遇到过这样的情况，求帮忙！
0 M9 m- x$ d4 d+ f! X+ }注：1、培养基清澈，且无菌检测阴性，不像污染。
2 F2 w) c% B0 {  Q5 ]       2、胰酶0.05%，消化时长30s-2min，细胞变圆皱缩时终止消化。

qinchuanniu

培养液原因：你用的是是无血清还是有血清培养液，这次是否更换过，如果你的细胞不用于人体内治疗，可适当提高培养液血清浓度；培养皿（瓶）的原因：有些品牌的质量不稳定，会影响细胞贴壁，可以用多聚赖氨酸、白蛋白溶液或适当浓度的血清处理一下。

理科小文艺

1.培养液成分是否有变动？, }8 ?5 g: Q& A
2.培养箱参数监测是否有问题？
. ?0 }" [$ T' m+ I) f3.是否进行了支原体检测？  e. i! Z# }' j8 u; q# R- h( _
4.培养瓶确定是贴壁细胞用？

rzghc

建议你测一下支原体。

baby00000003

8 Z' n4 G0 @: e/ L- ^* N; i. I% [( P4 U$ \: t
从试剂到设备，整个流程查一遍
8 \3 R" {2 _& X( U6 T比如，配液配方、耗材货号、离心机参数、培养箱参数......+ |0 F4 t7 N$ ^+ ?# W1 d
4 k  \5 ]5 K! L( ~& O7 `
如果连续培养几天都有漂浮的细胞，直觉上是培养基配方的问题

fenglinzhu

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/ R$ A$ K- q. I
! x! z5 m1 v6 a1 {只有少数一两皿传代前生长良好，传代后不贴壁。大部分细胞传代后都是正常生长的。

fenglinzhu

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) Z4 m( ~+ B: Z. }* K0 f  e9 ]" s* n2 c
只有少数一两皿传代前生长良好，传代后不贴壁。大部分细胞传代后都是正常生长的。如果是支原体污染，那不应该大部分会是这样吗？

fenglinzhu

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  d* I) T0 M1 T5 R
只有少数一两皿传代前生长良好，传代后不贴壁。大部分细胞传代后都是正常生长的。培养基也没有变动。

fenglinzhu

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( W1 t6 ]  d: C% D# E% u: O# B, z3 Z7 g4 U1 f
只有少数一两皿传代前生长良好，传代后不贴壁。大部分细胞传代后都是正常生长的。10%的FBS个人觉得不低了，而且我感觉细胞还是在增长，只是不贴壁了。

baby00000003

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' K9 ^1 }! A/ ?, Q' D4 ]. ~# g6 m, j+ z& P- e9 W4 W3 @# Y
那就不好猜了，是不是放在了培养箱里特殊的位置......要不就是不小心被紫外照了之类的....