关于血液加入到淋巴细胞分离液中的问题

wzs1985

回复 阿秀哥 的帖子" w  G0 E4 m* M% [. d1 G  w

# b+ P, N3 y$ L对的，  抱歉弄错了。
+ u. q; {4 F! w  P或者1比1也行。

Mrhydra52613

回复 gsg040222 的帖子2 z$ U0 A! v/ J4 J, |3 i

( \* e+ ?. N- I3 }1 o& z# R. |效果怎么样？话说你们实验室离心速度一般用多少的，我看论坛里这方面的差别还挺大的

long3390hai

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- V0 _6 I8 L0 S  W& b! n. P, f9 F) u% J4 r9 R
1、离心血液，去血浆，加等体积盐水稀释。
! J' k9 b% W- e2、混匀血液样品，在加好淋巴分离液的离心管（淋巴分离液：血液=1:1.5）中，沿管壁加入血液样品，先在管壁涂好一条通路，然后缓慢加入，保证液面不被冲破。4 b4 i- e1 z. M* N9 g: P/ X
3、离心转速慢升慢降。
( P2 j- ]7 _6 B4、离心之后，取其上清，在白膜层上方1cm，和下方1cm，全部取出。加盐水混匀，注意盐水和取出液体的比例大于2:1，这样有利于提取PBMC。

gsg040222

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) r) _4 T5 o1 h( n; ~/ d3 r: S- d% G& U$ K
谢谢

gsg040222

回复 Mrhydra52613 的帖子( c7 J" o: Z5 h2 ]( w+ o
  P$ U( [, A" q$ d' q
效果还是挺好的，我之前离心的话用的是3000r，效果还是挺好的，但是还是想更好点

gsg040222

回复 Mrhydra52613 的帖子
8 x; y# X6 o+ C+ f1 W3 ?3 h: u  i- I8 M( |* @; k) [6 }) U: ?
恩恩  ，就是要这个，非常感谢您

jxsese

加分离液时候要小心加入，一定要加到管底，不要沿着管壁加，另外每一种分离液用量都不一样，我们的一般都是稀释血液2：分离液1的量来加的，加的时候一定要调小移液枪的打出速度，第一个10ml越慢越好，后期可以适量加快。

wjh四月

全血离心后去掉血浆，加生理盐水补到原来位置，混匀，混匀后的血与淋巴液1：1加入。离心。15ml离心管效果更好

gubingxia

1盐水充分稀释（比例大于1:1）
# S8 F2 l3 x  q/ X1 e2 X  i2重悬混匀（不能有团块）
* T6 M. M3 _/ O) V- u- e2 y" N3血液与分离液比例1:1
# i2 b& {& j! w, |7 u/ O' X% ^4离心管倾斜45度左右，刚开始必须缓慢加液，先用吸管勾勒出缓冲通道，向上提一下，不能让血液直直的冲下去，冲力过大会冲破分界层，分界层建立后加液速度可逐渐加快，随着液面升高离心管慢慢直立起来，因为分离液有毒，要尽量减少与血液的接触时间，还要防止时间过长红细胞沉降
% \! g: @" y% t! k* g! j2 f5离心升10降19,600G5 ?8 E% W9 M, D: |
6取送离心管的过程要小心翼翼，不能晃动，以免打乱分界层。
; T* ?* L( ]: c5 e7可以先把上层浅黄色的血清吸走，留约3mm左右，眼睛的视线要与分界层平行或者从下往上看，以便更好的观察分界层，用吸管紧挨液面缓慢转着圈吸白膜层，边吸边轻轻移动，直到肉眼看不到有白膜层，尽量少吸白膜层以下的液体/ V7 l& d! x3 O* r! t2 s
8加盐水洗涤充分，离心洗涤3次，第一次1800r,5min,第二次1600r,5min，第三次1400r,5min
7 N! y; [7 |, U, m9培养
) l0 s7 i  ^* J8 E9 r, q- l! v. m我们就是这么提取的效果不错，希望对你有所帮助。离心力可能会因为离心机的品牌不同，参数也会不一样，这个要根据实际情况来调整。我们用的是四川曙光 的离心机

曦馨橙子

感觉稀释液可以多加点，混匀，不要有血块~