关于血液加入到淋巴细胞分离液中的问题

wzs1985

回复 阿秀哥 的帖子& G/ Y" `# I$ O& e/ b$ m. M$ E$ a
# O! W" M' z' w5 l7 I$ n
对的，  抱歉弄错了。
& o9 B0 G, T5 _或者1比1也行。

Mrhydra52613

回复 gsg040222 的帖子
# X6 X. y$ z9 |2 E- |! H+ k7 m" T+ ?9 q; Q$ q1 \
效果怎么样？话说你们实验室离心速度一般用多少的，我看论坛里这方面的差别还挺大的

long3390hai

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2 L( o! D( v2 [; y% O4 W
. O+ t3 j; V1 s1、离心血液，去血浆，加等体积盐水稀释。) c% L" h1 `- b; F; h
2、混匀血液样品，在加好淋巴分离液的离心管（淋巴分离液：血液=1:1.5）中，沿管壁加入血液样品，先在管壁涂好一条通路，然后缓慢加入，保证液面不被冲破。
  V4 c5 N* J9 Z) [& G- L3、离心转速慢升慢降。
" ^* q- i; r" j" p3 h& _, B) M4、离心之后，取其上清，在白膜层上方1cm，和下方1cm，全部取出。加盐水混匀，注意盐水和取出液体的比例大于2:1，这样有利于提取PBMC。

gsg040222

回复 long3390hai 的帖子* X# I. Y6 N1 l

  B" a* d( i2 |7 l& v/ o谢谢

gsg040222

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! n7 |+ Q- B) }, Y效果还是挺好的，我之前离心的话用的是3000r，效果还是挺好的，但是还是想更好点

gsg040222

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- W) ^& O. t8 u5 L" e; G3 s0 }% X* |5 C9 e& X
恩恩  ，就是要这个，非常感谢您

jxsese

加分离液时候要小心加入，一定要加到管底，不要沿着管壁加，另外每一种分离液用量都不一样，我们的一般都是稀释血液2：分离液1的量来加的，加的时候一定要调小移液枪的打出速度，第一个10ml越慢越好，后期可以适量加快。

wjh四月

全血离心后去掉血浆，加生理盐水补到原来位置，混匀，混匀后的血与淋巴液1：1加入。离心。15ml离心管效果更好

gubingxia

1盐水充分稀释（比例大于1:1）% u) {# }: |! j1 i! [. ]- J  m
2重悬混匀（不能有团块）4 m6 N( G" ~4 i$ N- w
3血液与分离液比例1:1
0 p# J/ e5 ^, e4离心管倾斜45度左右，刚开始必须缓慢加液，先用吸管勾勒出缓冲通道，向上提一下，不能让血液直直的冲下去，冲力过大会冲破分界层，分界层建立后加液速度可逐渐加快，随着液面升高离心管慢慢直立起来，因为分离液有毒，要尽量减少与血液的接触时间，还要防止时间过长红细胞沉降6 w7 ~( L  j% o# v
5离心升10降19,600G
) N7 K  O- M, g2 b1 [6取送离心管的过程要小心翼翼，不能晃动，以免打乱分界层。
1 I+ G/ T3 \: K7可以先把上层浅黄色的血清吸走，留约3mm左右，眼睛的视线要与分界层平行或者从下往上看，以便更好的观察分界层，用吸管紧挨液面缓慢转着圈吸白膜层，边吸边轻轻移动，直到肉眼看不到有白膜层，尽量少吸白膜层以下的液体
' s/ o# u( U2 B5 |( p! _2 f8加盐水洗涤充分，离心洗涤3次，第一次1800r,5min,第二次1600r,5min，第三次1400r,5min
6 e) M$ K5 V7 W; N/ h+ ]8 y9培养
4 b6 o3 H0 o" @2 I% h0 ?- T我们就是这么提取的效果不错，希望对你有所帮助。离心力可能会因为离心机的品牌不同，参数也会不一样，这个要根据实际情况来调整。我们用的是四川曙光 的离心机

曦馨橙子

感觉稀释液可以多加点，混匀，不要有血块~