关于血液加入到淋巴细胞分离液中的问题

wzs1985

回复 阿秀哥 的帖子8 Q3 ]5 H" m  i6 X% J

2 d8 F# l  @. E1 W0 K- ^对的，  抱歉弄错了。
! s9 H3 M# s  K# h  s或者1比1也行。

Mrhydra52613

回复 gsg040222 的帖子2 k$ G- c! m/ i" H# k* Y+ \

$ N& |0 g; t: v) ?" x效果怎么样？话说你们实验室离心速度一般用多少的，我看论坛里这方面的差别还挺大的

long3390hai

回复 gsg040222 的帖子
8 @' R- {  \  ^/ }! p- \( E3 {5 @  P  [5 N% p; f
1、离心血液，去血浆，加等体积盐水稀释。5 E, _$ E8 e1 K9 @2 z9 o
2、混匀血液样品，在加好淋巴分离液的离心管（淋巴分离液：血液=1:1.5）中，沿管壁加入血液样品，先在管壁涂好一条通路，然后缓慢加入，保证液面不被冲破。
3 c$ \% e. @- d. c9 U; W3、离心转速慢升慢降。
( T1 n2 V+ {6 p: ?: f& o4、离心之后，取其上清，在白膜层上方1cm，和下方1cm，全部取出。加盐水混匀，注意盐水和取出液体的比例大于2:1，这样有利于提取PBMC。

gsg040222

回复 long3390hai 的帖子, n- k$ h0 B7 ?+ b* X
1 y7 o  ]! Z- S7 I% r' L1 r- O1 P: X/ Q
谢谢

gsg040222

回复 Mrhydra52613 的帖子3 F- l6 X+ O% E

. R9 E! D" ^7 G0 H$ Q- r' O效果还是挺好的，我之前离心的话用的是3000r，效果还是挺好的，但是还是想更好点

gsg040222

回复 Mrhydra52613 的帖子% H0 X; `" j0 _. ~

" A$ ]; u$ n. p' e* P5 d恩恩  ，就是要这个，非常感谢您

jxsese

加分离液时候要小心加入，一定要加到管底，不要沿着管壁加，另外每一种分离液用量都不一样，我们的一般都是稀释血液2：分离液1的量来加的，加的时候一定要调小移液枪的打出速度，第一个10ml越慢越好，后期可以适量加快。

wjh四月

全血离心后去掉血浆，加生理盐水补到原来位置，混匀，混匀后的血与淋巴液1：1加入。离心。15ml离心管效果更好

gubingxia

1盐水充分稀释（比例大于1:1）0 c$ l! u& T9 {7 m, D' c) o! R
2重悬混匀（不能有团块）  A" l: F6 g2 y& @* `* l9 m
3血液与分离液比例1:14 b7 C$ i9 Q3 t! u
4离心管倾斜45度左右，刚开始必须缓慢加液，先用吸管勾勒出缓冲通道，向上提一下，不能让血液直直的冲下去，冲力过大会冲破分界层，分界层建立后加液速度可逐渐加快，随着液面升高离心管慢慢直立起来，因为分离液有毒，要尽量减少与血液的接触时间，还要防止时间过长红细胞沉降
9 Q( L( r! n* E" ~% w  j5离心升10降19,600G0 f) W( \' c; _# }0 [4 [! K3 p' e+ ^
6取送离心管的过程要小心翼翼，不能晃动，以免打乱分界层。
& T# h/ x9 T& b4 V7可以先把上层浅黄色的血清吸走，留约3mm左右，眼睛的视线要与分界层平行或者从下往上看，以便更好的观察分界层，用吸管紧挨液面缓慢转着圈吸白膜层，边吸边轻轻移动，直到肉眼看不到有白膜层，尽量少吸白膜层以下的液体
1 \4 P# P5 z, _& r* R! c  \# X8加盐水洗涤充分，离心洗涤3次，第一次1800r,5min,第二次1600r,5min，第三次1400r,5min
5 `; y3 ~2 R" l7 [9培养
! H3 u- I9 S8 a1 o% q* A我们就是这么提取的效果不错，希望对你有所帮助。离心力可能会因为离心机的品牌不同，参数也会不一样，这个要根据实际情况来调整。我们用的是四川曙光 的离心机

曦馨橙子

感觉稀释液可以多加点，混匀，不要有血块~