关于血液加入到淋巴细胞分离液中的问题

wzs1985

回复 阿秀哥 的帖子
' W1 Z. l: t: R  z0 t' J& E/ z; J& o/ V; h
对的，  抱歉弄错了。$ y) F; Y+ i3 A( [
或者1比1也行。

Mrhydra52613

回复 gsg040222 的帖子& x5 J! t& J, b% h8 w, R7 X0 P

+ R6 T8 n0 N9 a' w) Q' o' q9 K效果怎么样？话说你们实验室离心速度一般用多少的，我看论坛里这方面的差别还挺大的

long3390hai

回复 gsg040222 的帖子
: E; f* w8 r1 P: i+ M' X7 G. p4 Y& @- E
1、离心血液，去血浆，加等体积盐水稀释。
& x6 \, M* Z" j6 \# W; p( U2、混匀血液样品，在加好淋巴分离液的离心管（淋巴分离液：血液=1:1.5）中，沿管壁加入血液样品，先在管壁涂好一条通路，然后缓慢加入，保证液面不被冲破。
- A5 T" {, f' U, u* x0 H! M3、离心转速慢升慢降。- u3 E# k. R) I/ D; X4 U+ Y
4、离心之后，取其上清，在白膜层上方1cm，和下方1cm，全部取出。加盐水混匀，注意盐水和取出液体的比例大于2:1，这样有利于提取PBMC。

gsg040222

回复 long3390hai 的帖子
! n: C$ [; Q4 W# b) o' g5 z3 h7 J7 g
谢谢

gsg040222

回复 Mrhydra52613 的帖子
, s! G+ P# |% K- C( s, I; d/ \
% Z' ?6 Z( \8 V# B  }8 A. S7 i效果还是挺好的，我之前离心的话用的是3000r，效果还是挺好的，但是还是想更好点

gsg040222

回复 Mrhydra52613 的帖子$ \9 h# s" P3 \( p/ E8 G; Z  W
8 a( R7 G1 S5 s9 b" D9 G
恩恩  ，就是要这个，非常感谢您

jxsese

加分离液时候要小心加入，一定要加到管底，不要沿着管壁加，另外每一种分离液用量都不一样，我们的一般都是稀释血液2：分离液1的量来加的，加的时候一定要调小移液枪的打出速度，第一个10ml越慢越好，后期可以适量加快。

wjh四月

全血离心后去掉血浆，加生理盐水补到原来位置，混匀，混匀后的血与淋巴液1：1加入。离心。15ml离心管效果更好

gubingxia

1盐水充分稀释（比例大于1:1）
* [' `+ ]& d! [3 D& k, }1 V6 w2重悬混匀（不能有团块）
* B2 [3 E. I9 o7 b/ h3血液与分离液比例1:1
. t2 @, ~( B5 H4离心管倾斜45度左右，刚开始必须缓慢加液，先用吸管勾勒出缓冲通道，向上提一下，不能让血液直直的冲下去，冲力过大会冲破分界层，分界层建立后加液速度可逐渐加快，随着液面升高离心管慢慢直立起来，因为分离液有毒，要尽量减少与血液的接触时间，还要防止时间过长红细胞沉降: ^6 N8 r9 }- j4 h9 M% G9 j" T
5离心升10降19,600G' m$ C* J4 z- ]4 j! ~9 o6 k" q
6取送离心管的过程要小心翼翼，不能晃动，以免打乱分界层。& I. i: X- ^  l7 k# e1 _$ p
7可以先把上层浅黄色的血清吸走，留约3mm左右，眼睛的视线要与分界层平行或者从下往上看，以便更好的观察分界层，用吸管紧挨液面缓慢转着圈吸白膜层，边吸边轻轻移动，直到肉眼看不到有白膜层，尽量少吸白膜层以下的液体
! x: [4 \2 w$ l/ ~# F! |8加盐水洗涤充分，离心洗涤3次，第一次1800r,5min,第二次1600r,5min，第三次1400r,5min$ v. K) |! B6 r( B
9培养
% K& z; e/ n8 w) c; F$ |我们就是这么提取的效果不错，希望对你有所帮助。离心力可能会因为离心机的品牌不同，参数也会不一样，这个要根据实际情况来调整。我们用的是四川曙光 的离心机

曦馨橙子

感觉稀释液可以多加点，混匀，不要有血块~