想问一下，有人取过鸡胚精原干细胞嘛？胚龄一般是多大呀？

yuangaoqian

想问一下，有人取过鸡胚精原干细胞嘛？胚龄一般是多大呀？

xionghao508

在国内，扬州大学动物科技学院的李碧春教授的课题组对这个研究很深，你可以去问问！

yuangaoqian

谢谢

jiaguwentt

回复 yuangaoqian 的帖子/ P1 c2 W6 k# p

* Q* ^( S/ D5 i9 D0 I0 W0 p你好，由于我权限的问题，我无法留言，我想问问一下，addgene上买质粒，可以找代理报关的问题，谢谢，

yuangaoqian

代理报关？我不太清楚，当时我们是自己办的手续，需要向当地卫生检疫局和进出口检验局提供一些材料，你可以咨询一下你们当地的卫生检疫局

hcluo

其实国内也有代理或者构建买卖质粒的，不过最好选择大的公司，这样质量有保证一些。

coralqin

不才正是李老师门下，偶然看到这个帖子，贴一点我在读期间的实验方法，时隔数年，也许有了更好的改进，请明鉴：3 c7 p2 ~( _% v6 x

  }/ [$ c' T8 G) |+ H1.1 鸡精原干细胞的分离提取1 r6 d  ?5 e$ P9 G8 T6 m! M
取孵化19d鸡胚，无菌收集两侧睾丸，置于盛有事先预热的无Ca2+、Mg2+的PBS培养皿中，在解剖显微镜下用尖头摄子去除睾丸的附睾，脂肪垫及其白膜等附属组织后，将睾丸组织分成1mm3左右的小块，在PBS中轻轻吹打3min，静置5min后去上清液。沉淀加入10倍体积的1mg/ml胶原酶I在37℃条件下作用10～15 min，静置2 min后弃上清液，沉淀用胰蛋白酶工作液2ml在同样条件下作用3～5min，移上清液于10ml试管中并加小牛血清0.3～0.5ml（或与消化液相同体积，含有10%小牛血清的DMEM培养液）终止消化。剩余的组织块再加适量胰蛋白酶重复消化一次，倒置显微镜下见有单细胞和细胞团出现即可用小牛血清终止消化，悬液用350目过滤筛过滤，滤液移入10ml离心管中，1000r/min离心8min后吸去上清液。
( m* Q: O9 M# c9 Y

coralqin

1.2 精原干细胞的培养体系. ~5 S' x2 K$ m* S* T
培养体系： DMEM培养基，添加10%的胎牛血清、2%的鸡血清、2 mmol/L L-谷氨酰胺、1 mmol/L丙酮酸钠、5.5×10-5 mol/L β-巯基乙醇、5ng/mL hSCF、10UI/mL mLIF、10ng/m bFGF 、0.04ng/mL hIL-11、10ng/mL IGF和100U/mL硫酸庆大霉素。以鸡胚胎成纤维细胞作饲养层。温度37.5℃，饱和湿度，5%的CO2浓度。& }9 A$ N% C1 m8 |! A% }+ G- r

coralqin

1.3 精原干细胞的形态特征1 _$ e7 M1 X$ ~: Z. M. T
精原干细胞呈圆形或椭圆形，体积较支持细胞及其它体细胞大，.细胞核较大且圆，处于细胞中央或近中央位置。在光学倒置显微镜下，根据其形态大小可与其它细胞区分开来。油红O染色后，因为支持细胞中含较多的脂滴，所以支持细胞呈红色，精原细胞着色较浅或不着色，苏木精复染之后，支持细胞整个被染成蓝色，精原干细胞细胞核被染成蓝色，胞质部分不着色。间质细胞特异性染色，观察到含有暗蓝色沉淀颗粒的细胞为间质细胞。
5 y5 J1 c& k3 X6 ?

coralqin

斗胆提醒一句：这种细胞不好养，请三思而后养！如果仅仅是发表文章，想拿到学位，建议采用已建系的干细胞系进行实验研究，如ES-D3, iPS14#D1等, 几千元就可以买到。本人曾做干细胞建系工作5年，耗费了大量的人力物力财力且心力憔悴。