想问下目的基因是怎么从包装细胞整合到靶细胞的，机制是怎么样的？



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sky512829

新手上路

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发表于 2009-9-2 23:06 |显示全部帖子

很好谢谢想问下目的基因是怎么从包装细胞整合到靶细胞的，机制是怎么样的？
我就是不明白，293FT产生的是假病毒？% @4 W+ u0 F0 o3 Q8 Q: W
我们实验室只是用两个质粒转293FT，一个是逆转录病毒质粒载体既是包装质粒，一个是目的基因质粒，转染第二天就开始收病毒感染靶细胞了

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泡沫清风

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发表于 2009-9-3 11:33 |显示全部帖子

本帖最后由泡沫清风于 2009-9-3 11:38 编辑

不同的包装细胞系是不同的！我没有用过293FT。而且逆转录病毒系统有很多种，所以质粒的数量不是关键。像Phoenix细胞系，本身就整合了包装系统，只要转一个带目的基因的质粒就行了。2 i% q) _, g% {7 j5 b1 d1 i
包装细胞的目的是整合质粒，形成带有目的基因的病毒。再用该病毒感染目的细胞，逆转录和慢病毒是整合型病毒，也就是所谓的能将目的基因整合到宿主的基因组中，形成稳定的转染产物，随着传代不会丢失。% ?7 d2 ^, F+ w `$ n: U2 L
这里所谓的假病毒意思是指包装出来的病毒并不是活病毒，这种病毒只能感染一次，感染至目的细胞后，目的细胞不能再产生病毒，因为目的细胞没有病毒的胞膜蛋白基因，不能形成病毒颗粒。其实这里就涉及的为什么要分成2个包装载体或三个包装载体。病毒主要由三个核心基因组成，pol+gag+env，如果是2个包装载体，那么就是pol和gag在同一个载体上，env单独一个载体。如果是三个包装载体，那么三个基因分别在三个载体上。这样做的目的一是为了降低危险性，二就是形成的病毒是基因缺陷性的假病毒颗粒。
至于第几天收病毒上清，各有各的说法，但是我看过的文献和protocol里大多都是48和72小时各收一次。至于12小时的时候应该上清中也有病毒，但是浓度没有48小时的高。