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大头娃娃宝宝

新手上路

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楼主

发表于 2009-9-7 23:06 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

我要抽外周血--加入淋巴细胞分离液--离心--得到单个核细胞--加入抗体-流式细胞仪检测内皮祖细胞的数量。但是因为流式细胞仪的使用时间一周只有一次，而我又需要不固定的抽取患者外周血，不能随抽随做，就牵涉到一个标本保存的问题。请问大家是否知道在哪个阶段进行细胞的冻存呢？是不是在分离出单个核细胞以后冻存，到测的时候再复苏，加入抗体上流式检测啊。还是血一抽出来就冻存呢？

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金话筒优秀版主

沙发

发表于 2009-9-20 21:11 |只看该作者

细胞冻存一般在细胞生长到80-90%融合时才可以冻存，冻存时要保证细胞的密度，即3-5*106，冻存液也是关键，根据不同细胞选择不同配比浓度的冻存液，一般用60%DMEM
+40%FBS+10%DMSO。冻存时，降温的顺序更关键，推荐使用程序降温仪，细胞死亡数会最小。复苏时，从液氮中取出后立即放入42度水浴锅中，晃动，待冻存管中冻存液融化有黄豆粒大小的冰粒时取出，继续培养即可。一点经验之谈，大家讨论！

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swat334147161

新手上路

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藤椅

发表于 2010-7-13 10:52 |只看该作者

谢谢楼主！

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lifeida

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板凳

发表于 2010-7-13 11:34 |只看该作者

我们实验室冻存是：细胞生长到80-90%，冻存细胞的密度：10的6次方数量级，冻存液：DMEM+20%FBS+10%DMSO。我们使用的是程序降温仪，先-70度过夜，然后再放液氮。复苏时，从液氮中取出后立即放入37度水浴锅中，晃动，待冻存管中冻存液融化有黄豆粒大小的冰粒时取出，继续培养即可。以上是培养人成纤维细胞的方法。