各位资深研究员，我的细胞怎么了？

yunxinxu

实验室最近在养小鼠胎儿成纤维细胞，出现了奇怪的现象，请教各位研究员，请为我诊断一下！
( R# C+ M  Y, _4 T% \6 }0 X. v在制备小鼠胎儿成纤维细胞的时候，我采用的是组织块贴壁法，在前几天，贴壁的组织块长势很好，在第三天，我更换了新的DMEM+10%FBS,结果，第二天早上培养皿发现组织块开始脱离，原来爬出来的细胞也开始脱落，但培养瓶里的没有出现这种现象。同时，培养液并没有污染的迹象。于是，我又换了原来的培养液，半天后，组织块仍然继续脱落，培养液并不浑浊。接着，我又重新配制了新鲜培养液，更换后就好写了，幸存下来的细胞开始快速生长。不行的是，上周五更换完第二次配的培养液后，细胞长的还好，但到了周日下午，细胞培养液就变黄了，原来形态很好的细胞开始变的扁平。于是，我更换了新的培养液，结果细胞状态仍然越来越差，形态开始变形。但同时处理的另外两个皿形态还是很好。不知道为什么？现在细胞已经越来越差了。图片在附件中，请帮忙诊断！

cdcliwei

我个人认为首先要再次核实细胞的来源和原代细胞培养的具体细节，如果没有问题，最好检测一下是否存在支原体污染！

cdcliwei

另外，实验室的培养条件和培养基的配制往往是造成细胞生长异常的常见因素，但也是常常被忽视的问题，以上内容是个人浅见，仅供参考！

cdcliwei

另外，实验室的培养条件和培养基的配制往往是造成细胞生长异常的常见因素，但也是常常被忽视的问题，以上内容是个人浅见，仅供参考！

Jonathan

个人觉得，你的细胞原代培养上，可能筛选不好。照片看来，细胞种类很杂。支原体最好先测一下。培养基变黄可能是细胞生长太旺盛了。你一个P6盘加多少培养基？

yunxinxu

感谢以上几位研究员给提供的参考意见！7 z5 g2 T2 l9 M) w* f
我用100mm的培养皿，我一般加8-10毫升，培养基都是买GIBICO的液体培养基，只加入10%HYCLON的FBS.

cortex

100mm的培养皿8－10毫升，就像你提供图片的密度（最后两幅），是管不了3天的。有可能是培养基换迟了。
/ t5 k2 y  n, z# q5 i) k培养基的加入需要根据你细胞的密集程度不同，刚开始可以少加一些，后面必须多加一些。

have-a-rest

小老鼠的胎儿成纤维细胞，最好采用酶消化。

Jonathan

8# cortex
6 A  t8 |& C$ S# d同意此意见。
3 i* }, y; U3 {/ F4 m% x9 W& V
& h; |* }* [' _  o5 L( |( ?: v1 jP100的盘，到后面8ml估计只能维持一天。所以培养基很快就会黄的。一般细胞密度大，可以加12ml。