求助-怎么养MEF细胞

david123

我认为你购买的细胞不纯，在分离MEF时，其他细胞没有去除干净，所以你培养时就会出现其他的形态。

Te.L

大家有用gibco的DMEM高糖培养基养的吗？

Jonathan

6# Te.L
6 K/ L  i' J" K& ?# B6 f8 Y7 U8 `9 C) r
培养基和血清都是用Hyclone的。FBS和DMEM高糖

xyzengh

MEF细胞恐怕算最好养的细胞了，NEAA要加，L-Glu和抗生素不是必需的，成纤维细胞本来就应该是“张牙舞爪”的嘛，呵呵，不放心的话发图上来大家帮你看看。另外MEF如果用于做feeder的话一般都不要超过3-5代，否则效果非常不好。你买回来第一代解冻后，第二代就大量扩增冻存，以后用一支解冻一支。

上海过客

楼主 我也 遇到 你一样的问题了 ， p0代，P1和p2代细胞都很好，但是到了p3代细胞感觉就不好了。我仔细的对照了一下 自己的做法和别人的操作流程 。
- I; ]9 c, d5 D; v% q5 V" w. s0 q9 S" o
可能的原因有两个  ：1   起始胚胎的种植量  没有按照 1个胚胎，一个T175的培养瓶的密度。我的是 密度大大超过了，  10个胚胎只用了 5个10CM DISH 。 细胞早就开始老化了。所以培养到P3代 就老化了。
# p8 H/ J& d3 g! Z. {, E: e                    解决的办法是 ：  使用T175的 培养瓶， 密度严格控制 。 我已经订购了 t175的瓶子。
. X; p9 V7 Y( P                    2   有可能是污染 ，开始不严重，随着培养过程进行，会显示出来 。这个比价麻烦了。
' q7 X( ~3 d+ E6 [8 Z1 v4 W! g- M3 [8 T                   解决办法是：  重新培养。
" T' c% T: k, r. n. O/ t! O
; c! L' d  t$ U' p" G0 B          针对这两个问题 ，可以先 试试能不能解决你的问题。

mmssyyee

为什么要加NEAA啊，它起什么作用啊？只用DMEM+10%FBS+p/s不行吗？

chendongbo338

MEF细胞一般十倍镜下看是张牙舞爪的，主要细胞还是太密，该传代了

crystalwangsd

我养的MEF也只用DMEM+10%FBS+p/s. 看着也不错

Jonathan

回复 14# xyzengh 6 q* k# }' x7 ^9 l" g7 X/ ^/ t

1 p0 b% U  C. m, |7 Y+ p同意此说法，MEF一般到第六代，基本会死光光了。就算不死光，也会死很多，或者不会长。所以我们用来做ips的MEF，都是第二代的。第三代以上基本不用来做ips，而是用来做feeder。第四代做ips的话，效果很差，本人亲自实验过。

Helena110

MEF很好养的 但一般都用传代3-5次的，多了都不常用，不知道你用来做什么的，最好应该也在传代五次前用吧