求助-怎么养MEF细胞

Te.L

7 A5 [+ u# b+ x2 k3 o, M" q9 k  X4 K& k. d6 a+ |. G: j& A
我最近在养MEF细胞，但老是养不好，传了3代左右不仅长得慢，而且形态也不好。0 Z1 X% }5 z8 z: T8 z/ G% K  b
我用的皿和瓶是greiner的；DMEM高糖培养基+10%进口FBS+双抗。, L5 _5 k( K% w% }
传代是用0.05% Trypsin-EDTA，大概消化3-4min。
) [* e+ d3 c, a7 B- X5 c现在很是郁闷！急需各位的指点。MEF细胞难养吗？
- q% n- p, s! d/ J9 P5 Q' }谢谢！

yunxinxu

很难说问题在哪里？

双刀

再具体点

Te.L

谢谢各位！我的是从协和细胞库购买的第一代，买回来细胞形态都很好。
0 v1 A% M; g/ m9 J: Y* I0 P  E8 f" F; K但我传了一两次后细胞就出现了各种形态，像是张牙舞爪的。消化后正常的应该是均匀的、很圆滑，但我的变成了大小不均、不圆滑了。
7 X- m3 C) h# Y1 J$ h我想请教，你们对培养基和血清有什么要求？还要添加非必须氨基酸和谷氨酰胺吗？. ^5 |. H! e' t. G" N
能告诉我一些你们养MEF的具体细节吗？    感谢

Jonathan

MEF培养基的话，我们实验室是要加L-Glu和NEAA的。而且我们不加双抗。

Te.L

谢谢楼上！那你们用什么牌子的培养基和血清呢？货号能告诉我吗？

have-a-rest

细胞培养和其他实验一样，都需要一个基本功，那就需要多样一段时间，自己摸索经验。MEF细胞培养也许是最简单的，但也不是一开始就能养好，多花点时间，会养好的。

芷瞻

MEF完全培养基：: F* g; N( a; W4 v1 k5 _, a. l. r' P
DMEM（Hyclone）+10%FBS（GIBCO, heat inactivated）+NEAA（1×,GIBCO）+ P/S（100units/ml P,100mg/ml S,Hyclone）
$ `' W( C1 l( x0 C4 m
' y1 _1 F4 o' W双抗可加可不加，不过，加一点更放心，养细胞最怕污染，尤其是新手
% C6 i  w) _5 u, [. o
1 i, f: g& l& w& H4 i# [至于你谈及的细胞形态，MEF是典型的成纤维细胞状，你可以上传你的细胞形态图，大家给你分析分析# j' d0 q5 ^6 m  r% ^
" A! O9 L) e5 f" G' r2 O# I/ m1 }
祝顺利！

芷瞻

至于Jonathan谈及的 L-Glutamine ，可以适当加点，本来DMEM培养基里含有，但是，时间长了，容易降解，所以，最好加点

Te.L

好的！谢谢大家！- p0 Y8 t/ d; u& H0 K" t
我也会自己认真摸索，也非常期待能听到大家更多的意见！