求助-怎么养MEF细胞

Te.L

+ I/ f  G1 c5 R

, B2 B8 h5 w( @9 k% Z3 \8 J我最近在养MEF细胞，但老是养不好，传了3代左右不仅长得慢，而且形态也不好。
9 a* u7 R: X1 J我用的皿和瓶是greiner的；DMEM高糖培养基+10%进口FBS+双抗。- q0 S8 W  _' C' l$ Y; E+ H- u
传代是用0.05% Trypsin-EDTA，大概消化3-4min。
5 Z' x% R$ J  X' y3 x  J现在很是郁闷！急需各位的指点。MEF细胞难养吗？
$ e8 n, l" }* q% a" `, p谢谢！

yunxinxu

很难说问题在哪里？

双刀

再具体点

Te.L

谢谢各位！我的是从协和细胞库购买的第一代，买回来细胞形态都很好。' h' G9 m/ A+ ~& k7 n" T% u
但我传了一两次后细胞就出现了各种形态，像是张牙舞爪的。消化后正常的应该是均匀的、很圆滑，但我的变成了大小不均、不圆滑了。5 I( _' W  _" A% |- k+ E4 d
我想请教，你们对培养基和血清有什么要求？还要添加非必须氨基酸和谷氨酰胺吗？8 H7 l. a; j8 w% H) }
能告诉我一些你们养MEF的具体细节吗？    感谢

Jonathan

MEF培养基的话，我们实验室是要加L-Glu和NEAA的。而且我们不加双抗。

Te.L

谢谢楼上！那你们用什么牌子的培养基和血清呢？货号能告诉我吗？

have-a-rest

细胞培养和其他实验一样，都需要一个基本功，那就需要多样一段时间，自己摸索经验。MEF细胞培养也许是最简单的，但也不是一开始就能养好，多花点时间，会养好的。

芷瞻

MEF完全培养基：
8 r$ a( m) I5 n: r$ y) eDMEM（Hyclone）+10%FBS（GIBCO, heat inactivated）+NEAA（1×,GIBCO）+ P/S（100units/ml P,100mg/ml S,Hyclone）
$ I# R. p0 O# ~% ?: S
+ O7 `" l5 g0 C0 u$ J4 N7 z双抗可加可不加，不过，加一点更放心，养细胞最怕污染，尤其是新手
& Q8 l/ q9 N$ S: ?) H9 D5 E7 l+ }, y4 t5 v" p# T) @5 W1 `
至于你谈及的细胞形态，MEF是典型的成纤维细胞状，你可以上传你的细胞形态图，大家给你分析分析0 _$ d) z7 P  _6 x+ J' K+ z

$ p- W9 n6 g+ I; n/ p' f祝顺利！

芷瞻

至于Jonathan谈及的 L-Glutamine ，可以适当加点，本来DMEM培养基里含有，但是，时间长了，容易降解，所以，最好加点

Te.L

好的！谢谢大家！0 n# a8 k0 L9 b0 G% f; J" |: s
我也会自己认真摸索，也非常期待能听到大家更多的意见！