求助-怎么养MEF细胞

Te.L

9 x% M! ^6 Q& J& O
+ J' k" t0 x! _9 B3 U3 Y. |  ]我最近在养MEF细胞，但老是养不好，传了3代左右不仅长得慢，而且形态也不好。
; l- G' L; z1 C3 h我用的皿和瓶是greiner的；DMEM高糖培养基+10%进口FBS+双抗。( E( T/ H2 A( Y/ m; S
传代是用0.05% Trypsin-EDTA，大概消化3-4min。
2 d# h; s- v% D现在很是郁闷！急需各位的指点。MEF细胞难养吗？6 ^  @3 P* h3 q+ A* V1 m9 G
谢谢！

yunxinxu

很难说问题在哪里？

双刀

再具体点

Te.L

谢谢各位！我的是从协和细胞库购买的第一代，买回来细胞形态都很好。2 H4 g  g& o! e+ e/ e" E
但我传了一两次后细胞就出现了各种形态，像是张牙舞爪的。消化后正常的应该是均匀的、很圆滑，但我的变成了大小不均、不圆滑了。
$ n* y  c4 A# y! A( p; Z: s我想请教，你们对培养基和血清有什么要求？还要添加非必须氨基酸和谷氨酰胺吗？9 z1 }0 B! O& _2 I, [
能告诉我一些你们养MEF的具体细节吗？    感谢

Jonathan

MEF培养基的话，我们实验室是要加L-Glu和NEAA的。而且我们不加双抗。

Te.L

谢谢楼上！那你们用什么牌子的培养基和血清呢？货号能告诉我吗？

have-a-rest

细胞培养和其他实验一样，都需要一个基本功，那就需要多样一段时间，自己摸索经验。MEF细胞培养也许是最简单的，但也不是一开始就能养好，多花点时间，会养好的。

芷瞻

MEF完全培养基：
/ i1 r- `& q/ p# gDMEM（Hyclone）+10%FBS（GIBCO, heat inactivated）+NEAA（1×,GIBCO）+ P/S（100units/ml P,100mg/ml S,Hyclone）9 Q. S& e1 G. t! R
+ G6 k+ {; w/ |( |
双抗可加可不加，不过，加一点更放心，养细胞最怕污染，尤其是新手3 X: K# R% {. e/ A

2 R$ ?' z7 I8 P- t/ N至于你谈及的细胞形态，MEF是典型的成纤维细胞状，你可以上传你的细胞形态图，大家给你分析分析
4 X* f( g% l- ]0 B8 J! ]% T5 c, R2 \% p: F
祝顺利！

芷瞻

至于Jonathan谈及的 L-Glutamine ，可以适当加点，本来DMEM培养基里含有，但是，时间长了，容易降解，所以，最好加点

Te.L

好的！谢谢大家！/ ]) l7 r, F. B' x9 ^5 J" f6 Z
我也会自己认真摸索，也非常期待能听到大家更多的意见！