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求助-怎么养MEF细胞 [复制链接]

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楼主
发表于 2009-9-17 14:13 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
本帖最后由 Te.L 于 2009-9-17 14:15 编辑 + I/ f  G1 c5 R

, B2 B8 h5 w( @9 k% Z3 \8 J我最近在养MEF细胞,但老是养不好,传了3代左右不仅长得慢,而且形态也不好。
9 a* u7 R: X1 J我用的皿和瓶是greiner的;DMEM高糖培养基+10%进口FBS+双抗。- q0 S8 W  _' C' l$ Y; E+ H- u
传代是用0.05% Trypsin-EDTA,大概消化3-4min。
5 Z' x% R$ J  X' y3 x  J现在很是郁闷!急需各位的指点。MEF细胞难养吗?
$ e8 n, l" }* q% a" `, p谢谢!
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沙发
发表于 2009-9-17 15:14 |只看该作者
很难说问题在哪里?

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藤椅
发表于 2009-9-17 21:48 |只看该作者
再具体点

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板凳
发表于 2009-9-18 09:28 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
谢谢各位!我的是从协和细胞库购买的第一代,买回来细胞形态都很好。' h' G9 m/ A+ ~& k7 n" T% u
但我传了一两次后细胞就出现了各种形态,像是张牙舞爪的。消化后正常的应该是均匀的、很圆滑,但我的变成了大小不均、不圆滑了。5 I( _' W  _" A% |- k+ E4 d
我想请教,你们对培养基和血清有什么要求?还要添加非必须氨基酸和谷氨酰胺吗?8 H7 l. a; j8 w% H) }
能告诉我一些你们养MEF的具体细节吗?    感谢

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专家 优秀会员 金话筒

报纸
发表于 2009-9-18 09:59 |只看该作者
MEF培养基的话,我们实验室是要加L-Glu和NEAA的。而且我们不加双抗。
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地板
发表于 2009-9-18 14:17 |只看该作者
谢谢楼上!那你们用什么牌子的培养基和血清呢?货号能告诉我吗?

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优秀会员 金话筒

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发表于 2009-9-18 16:00 |只看该作者
细胞培养和其他实验一样,都需要一个基本功,那就需要多样一段时间,自己摸索经验。MEF细胞培养也许是最简单的,但也不是一开始就能养好,多花点时间,会养好的。
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发表于 2009-9-18 16:14 |只看该作者
MEF完全培养基:
8 r$ a( m) I5 n: r$ y) eDMEM(Hyclone)+10%FBS(GIBCO, heat inactivated)+NEAA(1×,GIBCO)+ P/S(100units/ml P,100mg/ml S,Hyclone)
$ I# R. p0 O# ~% ?: S
+ O7 `" l5 g0 C0 u$ J4 N7 z双抗可加可不加,不过,加一点更放心,养细胞最怕污染,尤其是新手
& Q8 l/ q9 N$ S: ?) H9 D5 E7 l+ }, y4 t5 v" p# T) @5 W1 `
至于你谈及的细胞形态,MEF是典型的成纤维细胞状,你可以上传你的细胞形态图,大家给你分析分析0 _$ d) z7 P  _6 x+ J' K+ z

$ p- W9 n6 g+ I; n/ p' f祝顺利!
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发表于 2009-9-18 16:22 |只看该作者
至于Jonathan谈及的 L-Glutamine ,可以适当加点,本来DMEM培养基里含有,但是,时间长了,容易降解,所以,最好加点
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发表于 2009-9-18 19:09 |只看该作者
好的!谢谢大家!0 n# a8 k0 L9 b0 G% f; J" |: s
我也会自己认真摸索,也非常期待能听到大家更多的意见!
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