求助-怎么养MEF细胞

Te.L

. R% u* F6 e/ l# |- C0 d, m5 n
9 V( ]+ Z/ U. z  i) T& @' t
我最近在养MEF细胞，但老是养不好，传了3代左右不仅长得慢，而且形态也不好。; s. m" R# U4 g) f
我用的皿和瓶是greiner的；DMEM高糖培养基+10%进口FBS+双抗。
  {( M3 s* n& l& p- \$ m$ `- U9 S传代是用0.05% Trypsin-EDTA，大概消化3-4min。
0 e% j/ m7 m9 c现在很是郁闷！急需各位的指点。MEF细胞难养吗？
" J  [5 }8 i" i谢谢！

yunxinxu

很难说问题在哪里？

双刀

再具体点

Te.L

谢谢各位！我的是从协和细胞库购买的第一代，买回来细胞形态都很好。1 s, L* m3 x! e8 Q- C4 F
但我传了一两次后细胞就出现了各种形态，像是张牙舞爪的。消化后正常的应该是均匀的、很圆滑，但我的变成了大小不均、不圆滑了。/ O+ E; t( P- j& S6 q4 i; j
我想请教，你们对培养基和血清有什么要求？还要添加非必须氨基酸和谷氨酰胺吗？  u. i. i. y# g: H. Y
能告诉我一些你们养MEF的具体细节吗？    感谢

Jonathan

MEF培养基的话，我们实验室是要加L-Glu和NEAA的。而且我们不加双抗。

Te.L

谢谢楼上！那你们用什么牌子的培养基和血清呢？货号能告诉我吗？

have-a-rest

细胞培养和其他实验一样，都需要一个基本功，那就需要多样一段时间，自己摸索经验。MEF细胞培养也许是最简单的，但也不是一开始就能养好，多花点时间，会养好的。

芷瞻

MEF完全培养基：
* R1 ~& {0 G$ ?* |7 L! mDMEM（Hyclone）+10%FBS（GIBCO, heat inactivated）+NEAA（1×,GIBCO）+ P/S（100units/ml P,100mg/ml S,Hyclone）
: x9 N8 e6 p" a! J+ k! b
! U4 n- \& N3 x# C- O4 W- \" j* c双抗可加可不加，不过，加一点更放心，养细胞最怕污染，尤其是新手! q) d% e  D- {

' Z% }! m0 C9 j0 p7 k至于你谈及的细胞形态，MEF是典型的成纤维细胞状，你可以上传你的细胞形态图，大家给你分析分析
* }7 U3 K: I! D/ T
' o6 w" K& {  M祝顺利！

芷瞻

至于Jonathan谈及的 L-Glutamine ，可以适当加点，本来DMEM培养基里含有，但是，时间长了，容易降解，所以，最好加点

Te.L

好的！谢谢大家！; e" A) U+ ~6 D1 C7 u, r
我也会自己认真摸索，也非常期待能听到大家更多的意见！