求助-怎么养MEF细胞

Te.L

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- A; @$ m) O- X( t) M6 R( b我最近在养MEF细胞，但老是养不好，传了3代左右不仅长得慢，而且形态也不好。
) h% I# z8 E( J% {我用的皿和瓶是greiner的；DMEM高糖培养基+10%进口FBS+双抗。9 N  [& B! H! w9 Q
传代是用0.05% Trypsin-EDTA，大概消化3-4min。
" Q/ V4 m+ R" c4 w5 H现在很是郁闷！急需各位的指点。MEF细胞难养吗？- q; \% g9 p9 k5 u6 l% k; |
谢谢！

yunxinxu

很难说问题在哪里？

双刀

再具体点

Te.L

谢谢各位！我的是从协和细胞库购买的第一代，买回来细胞形态都很好。) w7 m. g( f; s! x/ j/ z
但我传了一两次后细胞就出现了各种形态，像是张牙舞爪的。消化后正常的应该是均匀的、很圆滑，但我的变成了大小不均、不圆滑了。" U* ^# \. s: P/ l5 l# z* G
我想请教，你们对培养基和血清有什么要求？还要添加非必须氨基酸和谷氨酰胺吗？
& B' R) }6 l/ V1 V能告诉我一些你们养MEF的具体细节吗？    感谢

Jonathan

MEF培养基的话，我们实验室是要加L-Glu和NEAA的。而且我们不加双抗。

Te.L

谢谢楼上！那你们用什么牌子的培养基和血清呢？货号能告诉我吗？

have-a-rest

细胞培养和其他实验一样，都需要一个基本功，那就需要多样一段时间，自己摸索经验。MEF细胞培养也许是最简单的，但也不是一开始就能养好，多花点时间，会养好的。

芷瞻

MEF完全培养基：
3 U& ~6 s7 j) a1 @$ d6 m/ s. H$ UDMEM（Hyclone）+10%FBS（GIBCO, heat inactivated）+NEAA（1×,GIBCO）+ P/S（100units/ml P,100mg/ml S,Hyclone）
6 B8 t$ u# L$ w- ^: Y5 h/ s. S0 V4 T* ^0 ~) U: l" [% g% _8 q# S
双抗可加可不加，不过，加一点更放心，养细胞最怕污染，尤其是新手
& h( V2 Y* ?! g, \2 J) X% a+ q9 P  k* ?; Z. F8 H# B' K
至于你谈及的细胞形态，MEF是典型的成纤维细胞状，你可以上传你的细胞形态图，大家给你分析分析
5 R! j- k9 L* s, S( B1 q5 b! s( F2 A9 `
祝顺利！

芷瞻

至于Jonathan谈及的 L-Glutamine ，可以适当加点，本来DMEM培养基里含有，但是，时间长了，容易降解，所以，最好加点

Te.L

好的！谢谢大家！7 a' D. T( n7 H7 ?: Z! D
我也会自己认真摸索，也非常期待能听到大家更多的意见！