求助-怎么养MEF细胞

Te.L

我最近在养MEF细胞，但老是养不好，传了3代左右不仅长得慢，而且形态也不好。2 p, K7 d0 I8 b: t- H9 S' e9 R3 u
我用的皿和瓶是greiner的；DMEM高糖培养基+10%进口FBS+双抗。/ M7 I" U  S$ V% ?8 S  g
传代是用0.05% Trypsin-EDTA，大概消化3-4min。
' W$ V3 u4 X1 g2 Z2 I, C现在很是郁闷！急需各位的指点。MEF细胞难养吗？
5 n! y" L& t% h' t- ~谢谢！

zpzp0312

应该不难养吧！
. [9 X" v4 W6 v或许是试剂质量的问题，也可能搂主在制作原代MEF时操作有问题。; s. D/ S0 z9 V1 d
慢慢来，把问题找出来，一切问题都会解决的！
5 V0 h& F8 V/ L7 \7 n- r6 W9 `& w6 o0 o3 q! ?' j9 p
MEF很好养

Te.L

谢谢！我的是从协和细胞库购买的第一代，买回来细胞形态都很好。' }. E( J! S* V& P  D7 e; [% U3 z
我想请教，你们对培养基和血清有什么要求？还要添加非必须氨基酸和谷氨酰胺吗？0 z6 i/ E$ o8 q: L3 D7 ^
能告诉我一些你们养MEF的具体细节吗？    感谢！

zpzp0312

我觉得至少要添加谷氨酰胺' R1 R/ S! B+ e( |' M
你在google搜索一下吧" _* {/ V  P3 M+ m
有关网页很多
* Z+ }/ m2 [+ x: `1 T% I+ R8 Ghttp://www.google.cn/search?hl=z ... A2&aq=f&oq=

Te.L

4# zpzp0312
: y" X6 v7 J: N/ U' u: L! H5 P
1 Z" Q  |% A; `# [) X
3 I% j$ p5 w8 N! r# X+ T9 K非常感谢！4 J9 X2 A$ c5 m4 M
请问大家还有什么细节的东西要注意呢？

xionghao508

小鼠胎龄最好是11.5天-12.5天的，胎龄太大不行，杂细胞太多！

POPOLD

PH值的问题

POPOLD

最好加些 neaa  g

随风的天使

我看了一下你的步骤，我感觉你的消化时间太长了，我每次只消化1分钟，然后用枪吹。消化时间越久死的细胞越多。

Te.L

9# 随风的天使 ' P' e* l6 m, q% z8 m/ }2 Q
7 N# f  j: S5 j; f2 F- [: `( n" |" Y& a

% g# E' h; V: |8 y受益！谢谢