细胞培养问答

细胞卡也

15 冷冻保存细胞之方法？$ ]: Y& L9 X4 \! h( v, K
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4 °C 30~60 分钟→ (-20 °C30 分钟*) → -80 °C 16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。1 ]' A* R" B9 a3 v! E5 z: q
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 °C 至–80 °C 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 °C 不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80°C 冰箱中，惟存活率稍微 降低一些。' X' ]# @5 t" N: c% T4 H
16 细胞欲冷冻保存时， 细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？# ^/ z+ z: y2 t3 z2 S
冷冻管内细胞数目一般为1x106 cells/ml vial， 融合瘤细胞则以5x106 cells/ml vial 为宜。% ~# D  d3 i; G- y" f
17 应如何避免细胞污染？ 细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法。0 h/ M$ p9 m7 q4 w1 M5 ^
18 如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？% c, b2 s$ ]- S) T. e1 k
直接灭菌后丢弃之。+ D# H0 [7 F0 j
19 支原体(mycoplasma) 污染的细胞， 是否能以肉眼观察出异状？6 v* q9 z1 u: I
不能。除极有经验之专家外，大多数遭受支原体污染的细胞株，, V7 F9 t+ }( r) {# f6 Y. X/ N
无法以其外观分辨之。
  y: C1 x# n% ^, O; p20 支原体污染会对细胞培养有何影响？' Z! v, l1 K  s+ ~. D/ M) I' `! ~
支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数， 代谢及研究之任一数据。故进行实验前，必须确认细胞为mycoplasma-free，实验结果之数据方有意义。

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